chromosome 6q21 에서의 새로운 tumor suppressor의 발굴

초록

목적 : 이제까지 여러 실험적 임상적 결과를 고려해 볼 때 chromosome 6q21 부근에 암 억제유전자가 존재할 것이라는 높은 가능성을 제기하고, 또한 신속하고 편리한 새로운 방법을 이용하여 염색체 6q21에서 새로운 암 억제유전자를 발굴하는데 있다. 방법 : 현재 LOH가 있는 것으로 알려진 chromosome 6q21 지역에 1M base당 10개의 putative transcriptional region을 찾을 수 있을것으로 추정되는 특별한 primer를 제작 하였다. 제작된 primer를 이용하여 상업적으로 판매되고 있는 cDNA library를 이용하여 PCR로 유전자를 screening 하였다. 각종 tumor cell line에서 발현수준을 측정하여 실제로 각종 cancer cell line들에서 발현이 없어지는지를 확인하고, 또한 제작된 primer를 이용하여 chromosomal DNA 상에서 deletion이 있는지 또는 loss of expression 인지를 분석하였다. 또한, 찾아낸 유전자가 cancer의 발생에서 어떤 역할을 하는지를 MCF-7에서의 과발현을 통하여 cell cycle 분석 및 세포주기 조절유전자의 발현의 정량을 통하여 알아보았다. 결과 : 특별히 제작된 11개의 primer set은 PCR을 통하여 cDNA fragments을 증폭시키는 것을 확인할 수 있었다. 각 fragment는 blast search를 통하여 기존에 알려진 유전자와 유사성을 비교분석한 결과 cloned 경우 새로운 유전자임을 확인하였고, 나머지는 너무 짧은 fragment가 생기거나 non-informative의 경우로서 이투 연구에서 배제시켰다. clone2를 비롯한 1, 7, 10은 small intestine, stomach, kidney, liver, ovary등에서 낮게 발현됨이 확인되었고, 이의 낮은 발현이 chromosomal DNA상에서의 이상에 기인 하지 않음을 알수 있었다. clone2의 경우, 두 개의 alternative splicing variants로 존재함을 확인할 수 있었고, human breast cancer cell line인 MCF-7에서 단백질수준은 낮게 발현되었다. 이의 기능을 알아보기 위하여 같은 cell line에서 과발현 시켰을 때 cell proliferation을 현저히 감소시켰으며, 또한 cell cycle inhibitor인 p21/waf1의 발현이 크게 증가되었다. 결론 : 이제까지의 clone들중에서 어느 것이 정말로 암의 발생과 진행에 연관되어있는지는 정확히 알수 없고 더 많은 연구가 수반되어야할것으로 사료된다. 그러나 clone2의 경우는 그 기능이 강력한 세포주기 억제 유전자인 p21/waf1을 transcriptional level에서 증가시키는 것으로 보아 암억제유전자로서의 가능성이 높다.

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