디프테리아 테타누스 독소융합 단백발현에 관한연구(Ⅰ): 디프테리아 독소 유전자의 클론닝

초록

Corynebacterium diphtheriae Park-Williams No. 8에서 디프테리아 독소의 A 절편을 암호하고 있는 0.9kb의 DNA 절편을 PCR 방법으로 생산했다. 생산된 0.9kb DNA 절편을 pBluescript SK에 클론했다. BamHI, PstⅠ SacⅡ와 XbaⅠ으로 절단한 chromosomal DNA에서 diphtheria 독소유전자를 확인하기 위해 독소 유전자중 A 절편을 암호하고 있는 PCR 생성 DNA를 Dig로 표지하여 southern blot을 했다. 제한효소로 절단한 chromosomal DNA상에 두개의 독소 유전자가 존재하는 것을 확인했다. 완전한 독소 유전자를 클론닝하기 위하여 XbaⅠ으로 절단된 DNA 절편 중 Dig로 발색된 3.4Kb DNA 절편을 클론닝했으며 이들의 제한효소 지도를 AccⅠ, EcoRⅠ, HindⅢ, KpnⅠ, PstⅠ, SacⅡ와 SaⅡ에 대하여 작성했다. 클론된 DNA 단편은 phage에서 유래한 독소 유전자 부위와 chromosomal DNA에서 유래한 부위가 att부위로 연결되어 있었다.

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