콜레라 백신 후보 균주 개발 및 경구용 다가 백신 delivery system으로서의 이용에 관한 연구

초록

목적 : 본 연구에서는 콜레라 독소 B subunit(CTB)가 Vibrio cholerae 백신 후보 균주 자체의 체외 또는 체내에서 과량 발현되는 백신후보 균주를 개발하여 차세대 경구용 사균 콜레라 백신 균주로 사용하고자 한다. 개발된 V. cholerae에서 과량 발현되어 세포 외부로 방출되는 CTB는 정제 한 후 역시 백신의 조합 물질로 사용할 수 있다는 장점이 있다. 방법 : CTB가 과량 발현 되는 V. cholerae 백신 후보 균주 제작을 위하여 각 혈청형의 콜레라 균주를 국내외에서 확보하며, 발현된 CTB를 균 내외에 집적할 수 있게 하기 위하여 필요한 자살벡터 및 transposon을 제작한다. 위의 자살 벡터는 CTB가 세포외로 방출될 때 사용되는 EPS pathway중의 epsE 유전자를 파괴하여 생성된 독소가 세포내에 집적되게 하려는 목적으로 제작하며, transposon에는 CTB 유전자를 삽입하여 세포내에서 random transposition을 시켜서 CTB가 과발현되는 V. cholerae세포를 ELISA 방법으로 스크리닝 하고자 하였다. 결과 : 백신후보 균주 제작을 위한 0395-N1((Classical, O1, Ogawa 형), 569B-N1 (Classical,O1, Inaba), M7922 (El Tor, O1, Ogawa 형), 2740-80(El Tor, O1, Inaba 형)균주를 확보하였다. CTB를 균내외에서 과량 발현하는 균주 제작을 위한 벡터 및 transposon 등을 각기 pWMM91 vector 와 Mariner based transposon을 이용하여 제작하였으며 pWM91 vector에는 Kanamycin cassette를 유전자에 삽입되게 크로닝한 DNA를 삽입하여 chromosome 외에 삽입시 epsE 유전자를 파괴하고자 디자인 하였으며, Mariner-based transposon에도 Mlul 제한효소 등을 이용하여 CTB 유전자를 적절한 위치에 성공적으로 크로닝하였다. 결론 : 위와 같이 콜레라 백신 후보 균주 제작을 위한 필요 균주 및 vector 등을 확보하였다. 본 연구는 전염성 질환의 국가 차원의 효과적인 대응을 가능하게 할 뿐 아니라, 질병관리본부의 백신 연구, 개발 능력을 향상 시키는 데 도움을 준다.

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