표면항원 및 유전자분석에 의한 V. vulnificus균의 계통분류학적 연구(Ⅰ): 지방산 조성 및 RAPD PCR에 의한 V. vulnificus균의 계통분류학적 연구

초록

목적 : 국내분리 V. vulnificus를 대상으로 유전자에 대한 RAPD PCR및 세포지방산 분석법을 실시하여 균종내 근연관계 및 다양성을 비교분석하고 역학적 지표로써의 활용 가능성을 검토하고자 하였다. 방법 : 1998년 국내 비브리오 패혈증 환자분리주 34주, 자연계 분리주 82등 총 V. vulnificus 116균주를 대상균주로 하여 3개의 primer, 즉 OPV02(5'TGATCCCTGG3'), OPV18(5'CCACAGCAGT3'), OPV20(5'GGACCCTTAC3')를 사용하여 RAPD분석을 실시하였다. UPGMA으로 PCR반응시험결과를 분석하였다. 자연계 분리균주 27주에 대한 지방산 조성분석은 MIDI사에서 권장하는 방법에 따라 대상균주로부터 methyl ester화시킨 지방산을 추출하여 가스 크로마토그래피로 지방산 조성을 검출하고, 그 결과를 Sherlock system으로 분석하였다. 결과 : OPV18 primer로 RAPD PCR를 실시한 결과, 2736bp부터 365bp사이에서 3-11개의 밴드가 관찰되어 다른 primer보다 다양한 밴드 양상을 나타내었다. 대상균 주는 4개의 형 (A-D)으로 분류되었는데 A형이 86균주(73%)로 가장 많았으며 A형은 다시 5아형 (a-e)으로 분류되었다. B형은 21주 (17%) 이였으며, C형 과 D형은 소수의 균주에서 관찰되었다. 국내분리 V. vulnificus의 주요 세포지방산 조성은 16:1 w7c(29.14%), 16:0(17.95%), summed feature 7(18:1 w7c/w9t/w12t, 15.37%), summed feature 4(16:1 w7c/15 iso 2OH, 5.81%), summed feature 3(14:0 3OH/16:1 ISO 1,5.38%)이였다. 대상균주의 지방산 조성은 Sherlock system의 V. vulnificus균 지방산 조성과 유사하였으나 16:0조성에서는 뚜렷한 차이 (5.57%)로 구별되었으며, Sherlock system조성과 다르게 대상균주 대부분에서 16:1 w9c, 17:1 w6c, 14:0 ISO가 분석되었다. 대상균주들은 지방산 조성에 의하여 세부적으로 구분될 수 있었다. 결론 : 환자 및 자연계로 부터 분리된 V. vulnificus 균주는 RAPD 분석에 의하여 4개의 형 (A-D)으로 구분되었으며 대상균주 대부분이 A형으로 분류되었다. 또한 대상균주는 지방산 조성의 차이에 의하여 세부적으로 구분되었다. 환자분리주와 자연계분리주의 분류형은 구별되지 않았으나 일부 분류형은 특정지역에서만 관찰되어, RAPD 분석 및 세포지방산 조성에 의한 분류형의 역학적 지표로써 활용 가능성을 확인하였다.

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