국내 유행주 분석을 통한 노로바이러스 신속진단법 개발연구

초록

목적 : 노로바이러스는 급성 위장염을 유발하며 오염된 식수 및 어패류의 생식을 통하여 감염되기도 하지만 특히 사람과 사람 사이에 전파가 가능한 전염성이 높은 바이러스로 알려 져 있다. 일반적으로 노로바이러스는 식품과 지하수 등 감염매개체에는 저농도로 존재하기 때문에 기존의 RT-PCR법으로는 분석하는데 많은 어려움이 존재한다. 본 연구에 서는 고감도의 Taqman probe를 이용한 real-time RT PCR법을 확립하여 미량의 노로바이러스 진단에 적용하고자 한다. 방법 : 노로바이러스 GⅠ과 GⅡ의 진단을 위한 real-time RT PCR에 사용할 standard RNA을 제작하기 위하여 ORF1-2 junction 부위의 유전자를 cloning 하여 invitro transcription를 통하여 RNA를 합성하였으며 국내에서 검출된 노로바이러스 유행주의 염기서열 결과를 토대로 GⅠ과 GⅡ의 검출을 위한 real-time RT PCR에 사용할 primer와 probe를 제작하였다. 결과 : 본 연구에서 확립된 real-time RT PCR의 노로바이러스에 대한 특이성을 확인한 결과 기타 장내 바이러스와는 반응하지 않았으며 민감도는 GⅠ과 GⅡ 검출한계가 10 copy 임을 확인하였다. 기존의 RT-PCR은 GⅠ과 GⅡ 각각 10⁵과 10²의 검출한계를 나타내므로 본 연구를 통하여 확립된 real-time RT PCR이 기존의 방법에 비하여 GⅠ은 10000배 정도 GⅡ는 10배 정도 검출능이 개선하였다. 결론 : 본 연구를 통해서 확립된 real-time RT PCR 기법을 이용하여 식품 및 환경검체에 낮은 농도로 존재하는 노로바이러스의 검출에 적용할 수 있을 것으로 사료된다.

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