국내 감염성 질환 병원체의 성상분석을 통한 표준실험실 체계 구축(Ⅱ) : 장내바이러스와 B형간염바이러스 국내 분리주의 성상분석(1)

초록

목적 : 무균성 수막염의 원인 병원체인 장내바이러스 중 국내에서 흔히 분리되는 분리주와 만성 간염을 일으켜 만성 간질환의 원인이 되는 B형 간염바이러스의 국내 분리주를 확보하여 바이러스 주요 단백질의 성상을 분석하고 항혈청을 확보함으로써 장내바이러스와 B형 간염바이러스 진단의 국내 표준 실험실 역할을 하고자 하였다. 방법 : 1997년 국내에서 분리된 coxsackievirus B5(CB5) genome 염기서열 결정을 위해 long distance PCR 및 TA cloning을 실시한 후 sequencing vector에 subcloning 하여 염기서열 분석을 실시하였으며 국내 B형 간염바이러스에 대한 유전자형 결정을 위해 S gene의 Restriction Fragment Length Polymorphism pattern 확인 및 염기서열 분석을 통해 genotype을 결정하였다. 또한 국내 B형 간염바이러스에 대한 전체염기서열분석을 위해 B형 간염바이러스의 X gene에 특이적으로 반응하는 primer를 이용하여 X 유전자 일부를 제외한 B형 간염바이러스의 전체유전자를 확보한 후 이를 sequencing vector에 subcloning하여 sequencing을 수행하였다. 결과 : 국내에서 분리한 Coxsackievirus B5 전체 genome에 대한 sequencing을 수행하여 이중 5' Non coding region을 포함하는 부분과 nonstructural region(Coxsackievirus B5 F3 and 5 subclone) 중의 일부에 대한 염기서열을 확보하였고 국내에서 유행하는 주요 장내바이러스에 대한 항혈청을 토끼면역을 통해 제조하고 각각의 바이러스에 대한 중화항체가가 2^(8)-2^(14)임을 확인하였다. 또한 B형 간염바이러스의 표면항원양성자로부터 추출한 B형 간염바이러스의 유전자를 이용하여 국내 B형 간염바이러스에 대한 유전자형이 모두 Type C임을 확인하였으며 이중 genotype C에 속하는 B형 간염바이러스에 대한 전체유전자를 포함하는 클론을 제작하고 이를 subcloning하여 일부 X 유전자를 제외한 전체염기서열분석을 완료하였다. 결론 : Coxsackievirus B5(CB5)의 5'-noncoding region과 일부 nonstructural region에 대한 염기서열 분석을 확보하였으며 우리나라에서 검출되는 HBV의 genotype을 확인하고 가장 흔히 발견되는 genotype C의 full clone을 확보하였다.

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