국내 감염성 질환 병원체의 성상 분석을 통한 표준 실험실 체계 구축 (Ⅲ) : 국내 mumps 바이러스 분리주의 재조합 단백질을 이용한 immunoblot assay

초록

목적 : 유행성이하선염(mumps) 바이러스의 주요 항원 부위인 nucleoprotein(NP) 유전자에 대한 재조합 단백질을 이용하여 항원성 및 면역반응성을 조사함으로써 국내 분리주를 이용한 mumps 진단제 개발을 위한 자료를 확보하고자 하였다. 방법 : 원핵세포에서 발현시킨 NP 유전자 재조합 단백질을 affinity chromatography를 이용하여 정제하였으며 이를 SDS-PAGE와 western blot을 실시하여 항원성을 확인하였다. 기존의 ELISA방법에 의해 mumps 특이 IgG 양성이나 음성으로 판명된 mumps 환자 및 의사환자의 혈청을 이용하여 IgG 특이 immunoblot을 실시한 후 항원으로서의 효능을 평가하였다. 결과 : NP유전자 재조합 단백질을 정제한 후 SDS-PAGE와 벡터에 특이적인 polyhistidine antibody를 이용하여 western blot을 실시한 결과 약 66kDa에 해당되는 band를 관찰하였다. 정제된 발현 단백질의 항원성 및 IgG 특이 면역반응성을 조사하기 위하여 76명의 mumps 감염환자 및 의사환자로 확진된 환자의 혈청을 이용하여 western blot을 통해 조사한 결과 기존의 ELISA 방법에 의해 IgG 양성으로 판명된 혈청 28건 중 22건(79%)에서 반응 강도의 차이는 있었으나 모두 양성으로 나타나 mumps 바이러스 NP유전자 재조합 단백질의 항원성을 확인할 수 있었다. 또한 mumps 바이러스 항체가 음성인 48건중 38건(79%)이 음성으로 판정되었다. 결론 : 국내 mumps 바이러스 분리주의 NP유전자에 대한 재조합 단백질을 확보하였으며 다양한 임상 검체와의 항원성 및 면역반응성을 확인함으로써 진단항원제로서의 효능을 확인하였다.

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