백시니아 바이러스 재조합 표면항원을 이용한 두창 예방백신 후보물질 효능평가

초록

목적 : 두창은 1980년 WHO의 공식적인 박멸선언 이후 전 세계적으로 예방접종이 중지된 상태이다. 하지만 2000년대 들어 생물테러 무기로서의 두창 바이러스 사용 가능성이 대두되면서 이에 대한 예방대책이 절실히 요구되는 상황이다. 두창은 현재 공식적인 치료제가 없으며 예방접종만이 유일한 방어 수단이나 현재 사용되는 백신은 동물의 체내에서 증식시킨 생백신으로 접종자에게 전신 질환을 유발하는 등 여러 부작용이 보고되고 있으며 양적으로도 매우 부족한 상태이다. 이에 국립보건연구원 간염폴리오바이러스팀에서는 효능과 안전성을 동시에 확보할 수 있는 차세대 두창 백신의 개발을 위해 주요 표면 유전자에 대한 재조합 항원을 이용한 예방백신 후보물질에 대한 연구를 수행하였다. 방법 : 두창 바이러스의 면역에 사용되는 vaccinia virus Lister strain(ATCC-VR1549)을 vero 세포주에 접종하여 다량의 바이러스를 확보하였다. 확보된 vaccinia virus의 주요표면 항원 유전자인 A33R과 B5R을 추출하여 중합효소연쇄반응을 이용하여 증폭하였다. 증폭된 유전자에 대해 Gel extraction 방법을 이용하여 정제를 실시하고 pBlue Bac vector를 이용하여 클로닝을 실시하였다. 클로닝된 주요 표면항원 유전자를 SF21 곤충세포주에 transfection 및 postinfection을 실시하였다. 이후 확보된 항원에 대해 western blot 및 ELISA를 통해 백시니아 항혈청에 대한 반응성을 확인하였다. 결과 : Vaccinia virus를 vero 세포에 접종하여 세포변성효과가 나타나는 것을 확인하였으며 A33R, B5R 2가지 표면항원에 대한 추출, 정제, 클로닝을 완료하였다. 또한 이를 이용하여 recombinant baculovirus 제작을 완료하였다. 확보된 2가지의 vaccinia virus 주요항원에 대해 western blot 및 ELISA를 실시한 결과 hyper immune rera와의 반응성을 확인할 수 있었다. 이에 대해 PRNT(plaque reduction neutralizing test) 등을 이용하여 재조합 표면항원의 면역원성을 확인할 예정이며 다양한 adjuvant 및 접종 루트를 통해 백신으로서의 효능을 평가할 예정이다. 결론 : Vaccinia virus의 주요 표면 유전자에 대한 재조합 항원을 이용하여 안전하고 효과가 우수한 차세대 백신 개발을 위한 연구 성과를 통해 국내 두창발생에 적극적으로 대비하고자 한다.

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