효모성 심부진균증의 면역학적 진단용 표준항원 생산 연구

초록

목적 : 본 연구는 Candida albicans와 Cryptococcus neoformans의 국내 임상분리주를 대상으로 virulence factor와 동물독성 실험으로 표준항원 생산 균주를 선별하고 선별된 균주로부터 심부진균증의 진단용 표준항원을 생산하여 조기진단 가능성을 확인함으로써 심부진균증 진단용 kit의 국산화를 위한 기초자료를 제공하고자 한다. 방법 : virulence factor 실험과 동물독성실험으로 최종 선별된 Candida albicans KNIH 10 균주를 대상으로 enolase를 대량 생산하기위해 Candida albicans ENO gene으로부터 primer를 제작하여 PCR을 실시하였다. Cloning된 gene을 E. coli system에서 발현하여 발현된 enolase를 affinity column을 통해 정제하고 가토 혈청과 반응시켜 항원성을 실험하였다. Cryptococcus neoformans 균은 2차 동물독성실험을 통해 우량균주를 선별하였다. 선별된 균주에서 capsule polysaccharide을 추출하고 DEAE column chromatography을 통해 polysaccharide를 분리하였다. 분리된 분획들을 가토혈청과 반응시켜 가장 항원력이 뛰어난 성분을 선별하였다. 결과 : Candida albicans의 enolase primer로 PCR을 실시한 결과 1.323kb의 생산물을 얻었으며 subcloning된 생산물을 E. coli system에서 발현시켜 48kDa 분자량의 enolase를 확인하고 가토 혈청과의 immunoblot을 실시한 결과 발현된 48kDa enolase가 가토혈청과 반응하는 것을 확인하였다. Cryptococcus neoformans균의 1,2차 마우스 독성실험을 통해 최종적으로 NHPY24 균주가 높은 동물독성을 나타내어 항원 생산용 균주로 선별하였으며 NHPY24 균주의 항원은 column을 이용해 분리하고 가토혈청과 반응시킨 결과 0.2M NaCl 농도구배에서 분리된 polysaccharide가 항원성을 나타내었다. 결론 : gene cloning과 expression을 통해 얻어진 Candida albicans KNIH10 균주의 48kDa enolase는 immunoblot에 의해 항원성을 확인하였다. Cryptococcus neoformans 균에서 column을 통해 분리된 capsule polysaccharide중 0.2M NaCl 분획에서 분리된 polysaccharide가 가토혈청과의 반응에서 항원성을 나타내었다. 분리된 항원들의 특이성과 민감도에 대한 연구가 계속 필요할 것으로 보인다.

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