국내 감염성 질환 병원체의 성상분석을 통한 표준 실험실 체계 구축

초록

목적 : 우리 나라에 유행하는 HIV-1 subtype B의 molecular clone을 제작하고 유전자 특성을 분석함으로써 HIV의 진단, 치료 예방에 필수적인 국내 HIV-1 유행주의 reference reagent를 마련하고자 하였다. 방법 : HIV-1 전체 염기서열의 분석 결과, 전형적인 Korean B cluster에 속하는 대상군을 선정하여 5' LTR 부위 (660 bp)와 3' LTR 부위 (1045 bp) 그리고 near full length (8.8 kb) PCR 산물을 얻고 PCR recombination을 통해 full length HIV-1 genome을 제작하였다. 이를 pCR-script vector와 pCR 2.1 topo vector에 cloning하여 HIV-1 full length molecular clone을 제작하였다. 또한 restriction enzyme을 이용하여 HIV-1 infectious clone인 pNL4-3에 국내 분리주의 full env gene을 삽입시켜 HIV-1 chimeric molecular clone을 제작하고 C8166 cell에 transfection 시킨 후 효소면역시험법으로 HIVp24 항원을 정량하였다. 결과 : HIV/AIDS reference reagent로써 사용될 수 있는 다수의 HIV-1 partial clone (env, nef, LTR, 8.8kb near full length), 9.8kb full length clone, chimeric clone을 확보하였으며 pCR-script vector와 pNL43에 삽입되어 있는 HIV-1 full length 및 env chimeric clone의 감염성을 확인하였다. 또한 우리나라 유행주의 HIV-1 전체 유전자를 분석한 결과, mosaic genome를 갖지 않는 전형적인 B subtype의 HIV-1으로 나타났다. 그러나 국내 유행주의 LTR 부위 에서 subtype E의 특징적인 염기서열이 확인되었으며 gag와 pol 부위는 대체적으로 잘 보존되어 있었다. vif, vpr, vpu, nef 등 조절유전자 부위에서는 일부 염기의 삽입이나 결손이 관찰되었다. 결론 : 국내 특이적인 HIV-1 subtype B의 full length clone를 제작하여 국내 HIV 연구를 위한 reagent를 확보하였다. 이는 국내 HIV 치료제 및 백신 개발을 위한 중요한 기초 자료로서 제공될 것이다.

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