인플루엔자 바이러스의 conserved gene을 이용한 DNA 백신 개발

초록

목적 : 인플루엔자 바이러스의 빈번한 항원 변이에 영향을 받지 않는 백신 개발 연구가 다양하게 이뤄지고 있다. 이에 본 연구에서는 인플루엔자바이러스 국내 분리주의 matrix(M₁)와 nucleoprotein(NP) 유전자를 이용하여 광범위한 면역 효능을 나타낼 수 있는 DNA 백신 물질을 확보하고자 하였다. 방법 : 인플루엔자 바이러스 국내 분리주(B/Seoul/49/2004)의 유전자를 추출하여 RT-PCR에 의해 M₁과 NP 유전자를 증폭하여 클로닝하고 PCR, 제한효소절단 및 염기서열분석으로 확인하였다. 이후, 293T 세포에 transient transfection하고 SDS-PAGE와 western blot 및 간접면역형광항체법으로 발현 여부를 조사하였다. 발현이 확인된 DNA를 BALB/c mouse에 2주 간격으로 3번 면역 주사를 실시한 후 ELISA와 western blot을 통하여 항체 생성 여부를 조사하였다. 결과 : B/Seoul/49/2004 분리주 M₁과 NP 유전자의 coding region 부위를 증폭하여 (M₁, 743 bp; NP, 1, 671 bp) 발현 벡터 (pcDNA 3.1 anti V5/His TOPO plasmid)에 클로닝하여 재조합 클론을 확보하였다. 이후 293T 세포에서 M₁ 및 NP 단백질에 특이적인 27kDa 및 60.5kDa의 단백질이 발현됨을 확인하였으며 간접면역형광항체법에 의해서도 재조합 단백질 발현을 확인하였다. BALB/c mouse에서의 면역 전후 혈청을 이용하여 인플루엔자바이러스에 특이적인 면역반응을 ELISA로 조사한 결과 M₁에 대한 anti-IgG는 약 2배 정도 상승했으며, NP에 대한 anti-IgG 값은 약 5배 정도 증가하였다(P<0.05). 그러나 western blotting에서는 NP 단백질에 특이적인 밴드만 확인되었으며 이것은 ELISAS에서의 OD값과 일치되게 나타났다. 결론 : 본 연구를 통해 인플루엔자 B형 바이러스의 M₁ 및 NP 유전자에 대한 재조합 클론을 이용하여 mouse에서의 항체 생성을 확인함으로써 DNA 백신 후보 물질로서의 가능성을 확인하였다. 향후 세포성 면역반응 및 공격(challenge) 실험을 통해 DNA 백신 후보 물질로서의 가능성을 보완하고자 한다.

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