디프테리아, 테타누스 독소융합 단백 발현에 관한 연구(III)

초록

디프테리아와 테타누스를 동시에 방어할 수 있는 백신을 만들기 위해 독성은 없으나 면역원성을 갖는 두 독소 각각의 receptor−binding domain(RD)과 fragment C (FC)를 DNA상에서 융합시켜 E. coil에서 발현시켰다. PCR방법으로 RD와 FC을 암호하고 있는 DNA를 얻어 T−vector에 삽입해 각각 pTD와 pTT를 얻었다. RD와 FC을 융합하기 위한 전단계로 pTT를 BamHI과 BglⅡ로 절단 후 얻은 FC DNA를 같은 효소로 절단된 pTD에 삽입해 FC과 RD DNA가 융합된 pTTD를 만들었다. pTTD를 다시 BamHⅠ과 salⅡ으로 절단해 융합 DNA 절편을 maltose binding protein 융합발현벡터인 pMAL−c2와 6xHis 발현벡터인 pQE30에 삽입 하여 E. coil NovaBlue에 형질전환 했다. 이들 균주를 IPTG로 발현을 유도한 결과 pMAL−c2로부터 예상된 108Kd, pQE30으로부터 66Kd의 융합단백질을 SDS−PAGE상에서 확인할 수 있었다. 발현된 FCRD융합단백질은 많은 양이 세포질에 용해성 상태로 존재했으며 일부는 비용해성 상태로 존재 했다. 디프테리아 항독소를 이용한 immunoblot에서 pQE30에 발현된 QFCRD는 확인할 수 있었으나 pMAL−c2에 발현시킨 MFCRD는 확인할 수 없었다.

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