DNA 형광염색법을 이용한 mycoplasma 검출 염색기법에 관한 연구 : 바이오자원은행의 효율적 관리 및 활용에 관한 연구

초록

목적 : 바이오 자원중에서 세포주를 배양 시 세균, 효모, 곰팡이나 마이코프라즈마에 의해 오염이 발생한다. 다른 원인과 달리 마이코플라즈마에 의한 오염은 단순히 광학현미경을 이용한 검경법으로는 관찰이 어렵다. 이에 좀 더 신속하고 정확한 방법의 도입이 필요하여 본 실험을 수행하였다. 방법 : 본 실험에서는 형광염색법을 도입하여 배양중인 불멸화된 B-세포주에서 MycoFluor Mycoplasma Detection kit를 이용하여 마이코플라즈마의 오염유무를 관찰하였으며 기존의 PCR 방법과 비교하였다. 결과 : Hoechst 33258을 이용한 DNA 형광염색법을 통하여 기존의 마이코플라즈마 오염이 밝혀진 몇 가지의 세포를 사용하여 확인하였다. 본 실험에 사용된 샘플은 positive control로 사용된 샘플 보다 오염정도가 훨씬 작아서 염색에 의해 마이코플라즈마를 관찰하였을 때 낮게 나타났다. 이런 경우는 형광현미경으로 관찰시 negative로 판단할 가능성이 있으며 실제 실험시에는 이러한 점을 고려해야 할 것으로 생각된다. 결론 : DNA 형광 염색법을 통한 mycoplasma 검색 방법은 눈으로 직접 관찰할 수 있다는 장점이 있으나 mycoplasma 오염이 미세한 경우는 PCR을 이용한 mycoplasma detection방법이 sensitivity가 더 높을 것으로 생각된다. 그러므로 위의 두 가지 방법을 병행해서 수행하는 것이 세포의 오염을 판별하는데 도움이 될 것으로 생각된다.

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