Shigella sonnei LPS 항원에 대한 단클론항체 제조 및 특성

초록

목적 : 병원성 세균감염증의 유행을 예방하기 위해서는 환자 또는 환경가검물에서 균의 존재를 특이적으로 신속하게 검출할 수 있어야하나 종전의 전통적인 쉬겔라균 분리 동정법은 1주~2주의 시간이 소요되어 환자의 신속한 진단등에는 유용하게 사용되지 못하고 있다. 이에 본연구는 최근 국내 및 국외에 집단발생 및 감염예가 증가되어가고 있는 Shigella sonnei LPS에 대한 단클론항체를 제조하여 환자나 지하수등의 환경가검물에서 신속하게 이질균을 탐지할 수 있는 면역학적 탐지 시스템 개발에 필요한 기초자료를 제공코저 하였다. 방법 : S. sonnei phase Ⅰ과 phase Ⅱ를 면역주로 사용하여 이에 대한 단클론항체를 제조하였고 각 균체항원에 대하여는 ELISA법으로, 균체로부터 추출한 LPS에 대하여는 Western blot 방법으로 단클론항체의 항원결정기에 대한 특이성을 분석하였다. 또한 생산한 단클론항체의 마우스 복수액을 affinity chromatography로 정제하여 직접 식품이나 음용수등의 환경가검물에서 S. sonnei 균체항원을 탐색할 수 있는지 그 적용성을 검토하였다. 결과 : 제조한 항체들의 특이성 분석은 ELISA 검색에서는 해당 균체항원에만 특이성을 나타내었고, immunoblot법으로는 SsM-1 항체는 LPS 중 O-specific chain fraction과 반응하여 제조한 단클론항체가 O-polysaccharide moiety를 항원 결정기로 하는 항체임이 확인되었으며, SsM-RII 항체는 LPS 중 core oligisaccharide fraction과 반응하여 core specific epitope에 대한 항체임이 확인되었다. 마우스 복수액으로 부터 정제한 SsM-1 항체의 활성은 ELISA법으로 측정하였을 때, S. sonnei 항원농도가 10⁸cell/㎖시 391ng/㎖ 농도까지, 10⁷cell/㎖인 경우에는 700ng/㎖ 농도까지 감지할 수 있었다. 결론 : 이상의 결과들을 종합해 볼 때 본 연구를 통하여 제조된 SsM-1과 SsM-RII 단클론항체는 각기 S. sonnei phase Ⅰ과 phase Ⅱ에 존재하는 LPS의 O-specific polysaccharide chain 및 core oligosaccharide chain에 특이적으로 반응하는 항체들로서 환자나 지하수등의 오염된 환경 가검물에서 ELISA법으로 직접 S. sonnei균의 탐지가 가능한 것으로 예측된다.

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