콜레라 백신 후보 균주 개발 및 경구용 다가 백신 delivery system으로서의 이용에 관한 연구

초록

목적 : 본 연구에서는 콜레라 독소 B subunit(CTB)가 Vibrio cholerae 균주 자체의 체외 또는 체내에서 과량 발현되는 백신후보 균주를 개발하여 차세대 경구용 사균 콜레라 백신 균주로 사용하고자 한다. 개발된 V. cholerae에서 과량 발현되어 세포 외부로 방출되는 CTB는 정제한 후 역시 백신의 조합 물질로 사용할 수 있다는 장점이 있다. 방법 : CTB가 과량 발현되어 균 내외에 집적할 수 있게 하기 위하여 필요한 자살벡터(pWM91-D3E4Kan) 및 transposon(PSCGR1)을 제작하였다. 위의 제작된 벡터들을 이용하여 CTB를 과량 발현하여 균 내에 집적, 또는 방출하는 균주를 제작하였다. CTB 발현 여부는 GM1-ganglioside ELISA로 확인하였다. 사용된 벡터로 인하여 제작된 재조합균주의 chromosome에 존재하는 항생제 표지를 FRT recombinase를 발현하는 pCP20을 transformation 하여서 FRT site를 이용하여 제거한 후, DNA sequencing을 통하여 site의 소멸을 확인하였다. 결과 : 백신후보 균주 제작을 위한 0395-N1(Classical, O1, Ogawa 형), 569B-N1(Classical, O1, Inaba), M7922(El Tor, O1, Ogawa 형), 2740-80(El Tor, O1, Inaba 형) 균주를 확보하였다. CTB를 균 내외에서 과량 발현하는 균주 제작을 위한 벡터 및 transposon 등을 각기 pWM91 vector와 Mariner based transposon을 이용하여 pWM91-D3E4Kan과 PSCGR1을 제작하였다. 이 중 pWM91-D3E4Kan을 이용하여 CTB를 균 내에 집적하는 재조합균주 0395-N1-E1, 569B-N1-E1을 제작하였으며 PSCGR1 및 ELISA를 이용, 스크리닝하여 CTB를 발현하여 균 밖으로 배출하는 재조합균주 M7922-A1, A2, A3를 획득하였고, 이들 균주에 존재하는 항생제 표지를 pCP20을 이용하여 제거하였다. 결론 : 위와 같이 콜레라 백신 후보 균주 제작을 위한 필요 균주 및 vector 등을 확보하고 이를 통해 CTB를 균 내외에 과량 발현하는 재조합균주를 제작, 확인하였다. 본 연구는 전염성 질환의 국가 차원의 효과적인 대응을 가능하게 할 뿐 아니라, 질병관리본부의 백신 연구, 개발 능력을 향상시키는 데 도움을 준다.

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