신경세포의 퇴화기전이해와 신경성장인자를 이용한 신경재생촉진 연구(Ⅰ) : Recombinant leukemia inhibitory factor (LIF)-adenoviral vector를 이용한 신경재생 연구

초록

목적 : 배양된 망막 신경절세포의 axonal outgrowth를 촉진시키는 것이 확인된 leukemia inhibitory factor(LIF) 유전자를 가지는 recombinant adenovirus를 시신경손상모델에서 gene therapy하여 신경절세포(retina ganglion cell)의 생존과 재생을 촉진시킬 수 있는지를 시험해 보는 것이 본 연구의 궁극적인 목표이다. 방법 : LIF 유전자를 PCR을 이용하여 cloning하고 이들 유전자를 가진 재조합 adenovirus를 construction한 뒤, 이를 감염시킨 cell line에서 재조합된 유전자의 발현과 분비 여부를 RT-PCR, ELISA 그리고 western blot으로 확인하고, M1(mouse myeloblast) 세포에서 세포분화 증진효과를 측정함으로서 분비되는 LIF의 생리활성을 확인하였다. 현재 rat의 시신경과 sciatic nerve를 절단하여 신경손상 동물모델을 확립하였고 LIF를 함유하는 recombinant adenovirus에 의한 신경재생효과를 연구중에 있다. 결과 : Adenovirus genome중 E1이 결실된 cosmid(pAxCAwt, TaKaRa)에 rat LIF cDNA를 CAG promoter 뒤에 cloning하여 pAxCAwt/LIF를 제작하였다. 제조된 vector는 helper cell line인 293세포에 transfection시켜 homologous recombination을 유발, replication-incompetent recombinant adenovirus를 selection하여 얻었다. 재조합 adenovirus를 감염시킨 cell에서 LIF 유전자의 산물이 발현되는 것을 RT-PCR, ELISA, western blotting에 의해 확인하였고 또한 재조합 adenovirus를 감염시킨 cell에서 분비되는 단백질이 생리활성이 있음이 확인되었다. 결론 : LIF 유전자를 함유하는 재조합 adenovirsu를 제조하였으며, 만들어지는 LIF의 생리활성이 우수하였다.

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