에이즈치료의 최적화를 위한 항레트로바이러스제 내성주의 약제감수성과 viral fitness 분석

초록

목적 : HIV/AIDS 감염자로부터 분리된 내성변이체의 약제감수성과 viral fitness를 평가하여 내성기전연구 기반마련을 위한 HIV-1의 약제감수성 측정법과 복제능 측정법을 확립한다. 방법 : 복제능 측정법 관련 자료 수집과 기존에 보유한 백터를 이용한 관례적인 HIV 표현형 약제감수성 측정법 실험을 진행하였다. 대조군 및 환자군 유래 RNA를 분리 정제 후 내성유전자 부위의 염기서열을 확인하여 약제내성정도에 따른 환자군을 선별하였다. 또한 표현형 약제감수성검사를 위해 확보된 약제내성관련유전자부위가 결실된 pHXB2-벡터에 환자유래 pol gene을 삽입하여 재조합 클론을 제작, 세포에 co-transfection, syncytia 형성 유도, 상충액에서의 p24 수준으로 HIV 감염정도를 확인하였으며, MT2 phenotype assay를 수행하였다. 결과 : 약제감수성 검사법 확립에 필요한 co-transfection을 위한 최적 조건을 확립하였다. 결실 벡터와 PCR 산물의 최적농도(1:1)를 결정하였으며, transfection을 위한 세포주 선정 실험에 따라 C8166에서의 transfection 효율이 MT2를 이용하였을 때보다 높음을 확인하였다. Transfection, reagent에 따른 효율 비교(Lopofectamine>X-tremeGENE>Superfect) 실험을 수행 후, 이들 결과를 토대로 HIV-1 감염과 증식을 고려한 실험의 최적 기준을 제시하였다. HIV 표준주 및 임상 분리주에서의 바이러스 복제량을 비교 분석결과 각 분리주에 대해 HXB2-3B>KRB7021>KRB9149의 결과를 얻었다. 이상의 실험을 통한 HIV 표준주 및 임상분리주에서의 바이러스 복제량을 내성유전자 특성과 함께 분석하였다. 결론 : HIV/AIDS 감염자로부터 분리된 내성변이체의 약제감수성과 viral fitness 측정법 확립을 통하여 인체 내 HIV 바이러스 복제에 영향을 미치는 작용요인 분석을 통한 내성기전연구 기반을 마련하였다.

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