Azole계 내성 Candida 균의 내성기전 및 분자유전학적 특성 연구

초록

목적 : Azole계 항진균제인 fluconazole 내성 균주로 확인된 C. glabrata의 분자 유전학적 형별, 내성 관련 유전자 탐색 및 분자유전학적 특성을 조사함으로써 fluconazole 항진균제에 대한 내성기전을 분석하였다. 방법 : 임상에서 분리된 C. glabrata의 분자유전학적 형별 방법인 PFGE, RAPD를 이용하여 C. glabrata 분리주의 genotype을 분석하였다. 내성 관여 유전자 발현 분석을 위해 임상에서 분리된 fluconazole 내성 C. glabrata를 대상으로 CgCDR1, CgPDH1 유전자를 PCR을 이용하여 확인하고, 내성 유전자의 발현은 RNA을 분리한 후 slot blot을 통해 확인하였다. 또한 fluconazole 내성 C. glabrata의 알려진 내성 유전자 외에 내성에 직, 간접으로 관여하는 유전자를 동정하기 위해 RNA를 분리하고 random하게 구성된 primer kit을 이용하여 RT-PCR로 생성물을 관찰하여 발현되는 특성을 관찰하였다. 결과 : C. glabrata 임상 분리주 총 36 균주를 대상으로 PFGE를 실시하고 Dendrogram으로 연관성을 분석한 결과 29가지의 다른 type으로 분류할 수 있었고 총 36주중 28주는 75% 이상의 pattern 유사성을 나타냈다. RAPD PCR 결과에 의하면 총 35 C. glabrata 임상분리주에서 2가지 종류의 type만 확인할 수 있었다. 내성 유전자의 발현양상 분석 결과 감수성 균주 보다 내성 균주에서 CgCDR1 유전자가 CgPDH1 유전자 발현보다 더 높게 관찰되어 CgCDR1 유전자의 발현이 상대적으로 내성에 더 깊이 관여하는 것으로 나타났다. Random primer을 이용한 발현 정도차로 내성 관여 유전자의 검색 결과 2 종류 primer와의 반응에서 각각 650bp, 300bp의 PCR 산물을 확인하였다. 이들 PCR 산물은 southern blot으로 기존에 알려진 CgCDR1, CgPDH1 유전자를 probe로 검출을 시도하였으나 검출되지 않아 또 다른 내성 관여 유전자로 1차 확인되었다. 결론 : C. glabrata 분자형별은 동일한 형태는 거의 없었으나 75% 이상의 상동성을 나타내는 균주는 36주중 28주까지 관찰되었다. Fluconazole 내성 관여 발현 유전자중 CgCDR1 이 CgPDH1 유전자보다 발현 정도가 높게 나타나 우선적으로 fluconazole 내성에 관여하는 것으로 관찰되었다. Random primer을 이용한 내성 관여 유전자의 발현도를 관찰한 결과 650bp, 300bp의 PCR 산물을 확인하고 기존에 알려진 유전자와는 다른 유전자로 확인하였다.

키워드