국내에서 검출된 Norovirus 유행주 분석을 통한 특이 항체 제작 및 특성 분석

초록

목적 : 노로바이러스는 급성 위장염을 유발하며 오염된 식수 및 어패류의 생식을 통하여 감염되기도 하지만 특히 사람과 사람 사이에 전파가 가능한 전염성이 높은 바이러스로 알려져 있다. 일반적으로 노로바이러스는 식품과 지하수 등 감염매개체에는 저농도로 존재하기 때문에 기존의 RT-PCR법으로는 분석하는데 많은 어려움이 존재한다. 본 연구의 목적은 노로바이러스 유전자타입 별 특이 항체를 개발하여 항원항체반응을 이용한 진단법 확립에 적용하는 것이다. 방법 : 국내에서 주로 발견되는 genotype의 염기서열을 분석하고 이와 함께 국외에서 확보된 GⅠ과 GⅡ의 노로바이러스의 각각의 subtype 별로 아미노산 서열을 bioinformatics tool을 사용하여 비교 분석하여 약 10개의 아미노산 부위를 선정하였으며 이중 친수성이 강한 7가지 펩타이드를 제작하고 토끼와 쥐에서 각각 다클론 항체 및 단클론 항체를 제조하였다. 제작된 단클론 및 다클론항체의 노로바이러스와의 반응성을 평가하기 위하여 노로바이러스의 VLP를 제조하고 VLP, 분변 등과 제조된 항체와의 면역학적 반응을 EIA, Western blotting, 및 immunomagnetic separation(IMS)을 사용하여 평가하였다. 결과 : 본 연구에서 제작된 펩타이드 다클론항체는 모두 노로바이러스의 GⅠ 및 GⅡ와 특이적으로 반응하는 것을 Western blot 및 ELISA assay로 확인을 하였다. 또한 Western blot으로 확인한 결과 제조된 단클론항체의 일부가 노로바이러스의 VLP와 특이적으로 반응하는 것을 나타내었다. 그리고 EIA로 테스트를 해 본 결과 1개의 단클론항체가 반응하였다. 마지막으로 노로바이러스가 포함된 분변샘플을 이용하여 IMS 방법을 시도하였으나 검출이 이뤄지지 않았다. 결론 : 이러한 실험결과는 본 연구과제에서 제조된 단클론 및 다클론항체는 앞으로 노로바이러스 연구에 사용이 가능한 중요한 재료가 될 것으로 예상된다.

키워드