국내 감염성 질환 병원체의 성상분석을 통한 표준 실험실 체계 구축 (Ⅱ) : 국내 mumps바이러스 분리주 nucleoprotein 유전자의 발현

초록

목적 : Mumps바이러스 국내 분리주 중 대표주를 선정하여 주요 항원 부위인 nucleoprotein(NP) 유전자에 대한 염기 서열 분석 및 재조합단백질의 발현 양상을 조사함으로써 국내에서 유행하는 mumps 바이러스 연구 및 진단제 개발을 위한 기초 자료 등을 확보하고자 하였다. 방법 : 1998년 국내 유행성이하선염 환자로부터 분리된 mumps바이러스 분리주의 nucleoprotein 유전자를 RT-PCR방법으로 증폭, 클로닝하여 염기 서열 분석을 실시하였다. 원핵세포 발현 벡터를 이용하여 재조합단백질체를 생성한 후 SDS-PAGE와 western blotting을 통해 NP 재조합단백질의 발현 양상을 조사하였다. 결과 : 국내 mumps바이러스 분리주의 nucleoprotein과 leader 부위에 해당되는 약 1.9kb의 PCR 산물을 얻었으며 이를 클로닝 하여 제작된 pTONP981062의 염기 서열은 genotype B 형의 Urabe Am 9a주와 97.0%, Miyahara주와 97.1%, Odate-1주와는 97.8%의 상동성을 보였다. 이후 NP 유전자의 complete coding 부위를 PCR로 증폭하고 pQE30 벡터를 이용하여 mumps바이러스 NP 재조합단백질 클론(pQEMUVNP)을 생성하였다. 재조합 단백질의 발현 여부를 조사하기 위해 E.coli (M15)세포에서 배양 후 SDS-PAGE를 실시한 결과 약 61kDa의 단백질이 발현됨을 확인할 수 있었다. 또한 denaturation 조건하에서 정제 후 mumps virus monoclonal antibody와의 반응성을 western blotting에 의해 조사한 결과 약 61kDa의 band가 관찰되어 정제된 재조합단백질의 항원성을 확인하였다. 결론 : 국내 mumps바이러스 분리주의 주요 항원에 대한 재조합단백질을 발현시킴으로써 진단제용 항원 생산을 위한 기초 자료를 확보하였으며 향후 표준 항혈청 및 환자 혈청에 대한 혈청학적 검사를 실시하여 진단 항원으로서의 감도 및 특이도를 확인하고자 한다.

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