호흡기 바이러스 진단을 위한 single-tube multiplex-PCR법의 개발에 관한 연구

초록

목적 : 호흡기질환의 특성상 기존에 보고된 방법들로는 진단에 많은 시간이 소요되는 등 다양한 호흡기 바이러스의 진단에 어려움이 있어, 질환의 효과적인 치료방향 제시 및 유행 예측에 적용하기 어려운 실정이다. 호흡기 바이러스 진단에 있어 이러한 문제점을 극복하기 위하여 호흡기 질환 환자의 검체로부터 핵산을 추출하여 single-tube multiplex RT-PCR법을 통한 신속하고 정확한 진단법을 개발하고자 한다. 방법 : 호흡기 질환의 대표적인 병원체 중, INFV에 대하여 A/H1, A/H3, B형을 동시에 진단할 수 있는 INFV single-tube multiplex RT-PCR kit를, 그리고 PIV 1, 2, 3형, RSV A, B 형, ADV를 동시에 진단할 수 있는 single-tube multiplex RT-PCR kit를 개발하기 위하여 각각의 바이러스에 특이적으로 제작된 프라이머를 사용하여 multiplex RT-PCR을 수행하였다. 결과 : 호흡기질환 환자의 검체로부터 추출한 핵산을 대상으로 INFV를 아형별로 분석할 수 있는 single-tube multiplex RT-PCR kit를 이용하여 RT-PCR를 수행한 결과, INFV A/H1, A/H3, B형을 동시에 진단할 수 있었으나, 다른 호흡기 감염을 일으키는 바이러스에 대한 교차반응은 관찰할 수 없었다. 또한 여러 호흡기 바이러스를 분석할 수 있는 single -tube multiplex RT-PCR kit를 이용하여 RT-PCR을 수행한 결과 PIV 1, 2, 3형, RSV A, B형, 그리고 ADV를 동시에 진단할 수 있었다. 본 kit의 특이성과 민감도를 확인하였다. 결론 : 호흡기질환을 야기하는 다양한 바이러스의 진단과, 간편하게 실험실에서 적용할 수 있는 INFV 진단용 single-tube multiplex RT-PCR kit와 호흡기 바이러스 진단용 RT-PCR kit를 개발하였다. 본 연구에서 개발된 2가지 single-tube multiplex RT-PCR kit를 사용함으로써 신속, 정확하고 간편한 진단이 이루어질 수 있으므로 전국적인 호흡기 바이러스 실험실 진단 네트워크를 운영하는데 이용될 수 있을 것으로 기대한다.

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