Fas ligand 발현이 조혈모세포 이식 거부반응 억제에 미치는 영향

초록

목적 : 장기이식시 거부반응은 동종이식편에 대한 숙주의 면역 반응의 결과이며, 이와 관련된 기전은 Fas-Fas ligand를 통한 신호 전달에 의한 세포자연사이다. 이러한 사실에 착안하여 FasL를 발현하도록 조작된 이식편이, 숙주내의 동종항원 활성 림프구를 선택적으로 제거하도록하여, 궁극적으로 인위적인 면역특전 이식편의 성공적인 생착을 유도하고자 본 연구를 시행하였다. 방법 : 7마리 Balb/c 마우스의 대퇴골에서 골수세포를 얻고, 이중에서도 Sca-1⁺ 간세포만을 분리하여, 2주간 34℃, 5% CO₂에서 배양하고 실험에 사용하였다. Murine Fas ligand(mFasL) cDNA를 Sca-1⁺ 간세포에서 발현시키기 위하여 eucaryotic espression vector인 pBCMG-mFasL를 제작하고, cationic lipid molecule / DOPE 혼합물인 Tfx™을 이용하여 Sca-1⁺ 간세포 mFasL를 도입하였으며 이를 48시간 배양 후 발현여부 및 발현된 단백질 활성을 확인하였다. 결과 : Balb/c 마우스의 골수세포중 Sca-1⁺ 간세포는 약 1%를 차지하였고, mFasL가 도입된 Sca-1⁺ 간세포를 48시간 배양후 RT-PCR로 mFasL의 발현을 확인한 결과 pBCMG-mFasL가 도입된 조혈모세포에서 mFasL-mRNA의 높은 발현율을 확인하였다. FasL를 발현하는 Sca-1⁺ 간세포를 Jurkat cell을 표적세포로하여 혼합배양한 결과 Jurkat cell에서 Apoptosis가 일어나는 것을 확인하였다. 결론 : 본 실험의 결과는 인위적으로 FasL의 발현을 유도하면 숙주의 이식편에 대한 거부반응의 억제가 가능하다는 것을 보여주며, 마우스 모델을 이용한 in vivo 실험을 위한 기반을 제공할 것으로 사료된다.

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