중화시험법을 이용한 장내바이러스의 동정

초록

목적 : 먹는 물 수원에 존재할 가능성이 있는 바이러스 중 장내바이러스를 세포배양으로 증식하여 중화시험법을 통하여 혈청형을 동정하고 중화시험법으로 동정되지 않는 경우 유전자 감식법을 함께 실시하여 장내바이러스를 동정하고자 하였다. 방법 : 경희대에서 1차로 바이러스 배양, 검출한 후 국립보건원에 바이러스 동정을 의뢰한 총 38개의 검체 에 대하여 1차로 세포배양을 실시하고 장내바이러스 CPE 양성인 경우 중화 시험을 수행하였고 음성인 검체에 대해서는 장내바이러스 5‘-noncoding region과 VP1 region을 특이하게 증폭시킬 수 있는 primer를 사용하여 유전자 증폭을 통해 확인하고 양성인 경우 염기서열을 확인하여 유전자형을 결정하였다. 결과 : 경희대에서 인수받은 총 38개 검체 중 12개가 장내바이러스 특이 CPE를 보였으며 이들 CPE 양성 검체를 중화시험을 통해 바이러스 혈정형 확인 결과 CB4가 2개(정밀화도 3차 정수, 정밀화도 4차원수), CB5가 1개(정밀화도 3차정수), CB2가 1개(정밀공주 5차원수), Poliovirus type3가 8개(정밀 영천 5차 정수) 확인되었다. 유전자 증폭시험결과 세포병변효과를 보이지 않는 검체에 대하여 enterovirus 5‘-noncoding region의 436bp를 증폭시킬 수 있는 panentero primer를 사용하여 유전자 증폭을 수행하였으나 중화시험을 통해 혈정형이 확인된 4개 이외에 추가적으로 유전자 증폭을 보이는 검체는 발견되지 않았다. 한편 폴리오바이러스로 동정된 정밀영천 5차 정수 검체 8개에 대한 poliovirus VP1 region의 480bp를 특이적으로 증폭시킬 수 있는 PCR을 수행하여 염기서열 분석을 실시한 결과 Sabin 3와 99%이상의 homology를 가진 백신주인 것으로 확인되었다. 고찰 : 정수 검체 중에서는 화도 3차 정수검체에서 CB4, CB5가, 영천 5차 정수에서 Sabin 3가 동정되었으며 원수 중에서는 공주 3차 원수에서 CB4, 공주 5차 원수에서 CB2가 동정되어 2000-2001년 수행한 monitoring 사업에서는 수원에서 echovirus가 주로 검출된 것과 대조되는 결과이다. 한편 영천정수에서 검출된 폴리오바이러스에 대한 유전자 분석 결과 Sabin 3와 VP1 region에서 99.1-100%의 homology를 가지는 동일한 바이러스임을 확인함으로써 현재 세계보건기구에서 추진하고 있는 폴리오박멸사업과 관련하여 vaccine-derived poliovirus(VDPV)의 유행이 국내에서는 발견되지 않고 있다는 추가적인 자료를 제공하였다.

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