Orientia tsutsugamushi의 adhesion 관련 단백질의 발현 및 특성 연구

초록

목적 : 본 연구를 통하여 쯔쯔가무시의 생체 침투 기전과 병원성인자를 규명하고 숙주 세포 신호전달기전을 밝히는 연구에 기초 자료를 제공하고자 하였다. 즉, 쯔쯔가무시에서 진단키트나 백신 후보물질로 이용될 가능성이 있는 새로운 접합 단백질을 탐색하고자 코스미드 라이브러리를 제작하고 degenerate PCR을 수행하였다. 또한 기존에 알려진 47k, 56k Da 외막단백질을 클로닝하여 이들 단백질의 세포 내 특성을 조사하였고, balb/c 마우스에 R. typhi와 쯔쯔가무시를 감염시켜, 숙주세포 반응을 비교 연구하였다. 방법 : 쯔쯔가무시의 코스미드 라이브러리는 ZAP library kit를 이용하여 제작하였다. 접합 관련 단백질을 degenerate PCR 방법을 이용하여 검사하였다. 클로닝된 47k Da과 56k Da 단백질의 세포내 특성조사는 재조합 단백질을 정제하여 L929 세포에 쯔쯔가무시 감염 시 처리하여 실시하였다. 또한 마우스 DNA chip을 이용하여 R. typhi와 O. tsutsugamushi 감염 시 발현양상의 차이를 보이는 유전자를 비교 분석하였다. 결과 : 쯔쯔가무시 Boryong주의 유전체 라이브러리를 구축하였고, 외막단백질로 알려진 22k, 47k, 56k, 110k Da 단백질과 groEL등의 유전자를 클로닝하였다. 또한 degenerate PCR 방법을 이용하여 새로운 adhesion molecule로서 가능성 이 있는 유전자 5개의 염기서열을 찾았고 PCR을 수행하여 실제로 쯔쯔가무시의 gDNA상에 존재하는 것을 확인하였다. 쯔쯔가무시의 주요항원 외막단백질인 47k Da 단백질과 56k Da 단백질의 7가지 돌연변이형을 클로닝하고 단백질을 발현하여 이후 면역방어실험 등에서 이용할 수 있게 되었다. 마지막으로, balb/c 마우스에서 R. typhi와 쯔쯔가무시 감염 시 DNA chip 상의 분석결과를 이용하여 전체적인 쯔쯔가무시의 병원성, 비병원성 세포주의 접합/수용체 관련 유전자들의 발현양상 차이를 파악하여 차기 연구대상으로 lectin 등의 유전자를 선정하였다. 결론 : 위의 결과를 이용하여 쯔쯔가무시의 생체 침투 기전, 병원성인자와 숙주세포 신호전달기전 연구의 자료로 활용하게 되었다.

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