호흡기 관련 아데노바이러스의 진단 및 형 분석을 위한 Single tube multiplex polymerase chain reaction의 개발

초록

목적 : 아데노바이러스는 유아 및 성인에서 급성 호흡기질환을 야기하는 바이러스로서 현재까지 49종의 혈청형이 존재하는 것으로 알려져 있으나 이 중 약 1/3의 혈청형만이 인간에 감염되어 질병을 야기하는 것으로 알려져 있다. 호흡기질환을 유발하는 아데노바이러스는 B, C 및 E 아속에 속하며 이에 의한 감염은 다른 호흡기 관련 질환을 야기하는 세균 및 바이러스의 감염과 구별하기에 어려움이 많다. 따라서 아데노바이러스에 의한 호흡기 감염의 효과적인 치료방향을 설정하기 위해서는 아데노바이러스를 특이적으로 진단할 수 있는 방법의 개발이 절실히 요구되고 있는 상황이다. 본 연구에서는 호흡기질환을 유발하는 아데노바이러스를 형 특이적으로 진단할 수 있는 single-tube multiplex PCR법을 개발하고자 하였다. 방법 : 아데노바이러스 헥손 유전자의 고가변부위 및 파이버 유진자의 염기서열을 바탕으로 하여 11개의 특이적인 시발체(primer)를 제작하였다. 제작한 탐침과 아데노바이러스 표준주, Ad1(ATCC VR-1; Adenoid 71), Ad2(ATCC VR-846; Adenoid 6), Ad3(ATCC VR-3; G.B.), Ad4(ATCC VR-4; RI-67), Ad5(ATCC VR-5; Adenoid 75), Ad7(ATCC VR-7; Gomen), Ad7a(ATCC VR-8; S-1058), Ad40(ATCC VR-932; Dugan), 및 Ad 41(ATCC VR-930; Tak)를 이용하여 최적의 multiplex PCR 조건을 확립하였다. Multiplex PCR의 특이성을 규명하기 위하여 다른 호흡기질환 유발 세균 및 바이러스와의 교차반응을 관찰하였다. 또한, multiplex PCR의 유용성을 검증하기 위하여 국내에서 분리된 바 있는 23주의 아데노바이러스를 이용하여 실험을 실시하였다. 결과 : 형 특이적으로 제작한 시발체를 이용하여 6가지 혈청형의 호흡기질환 유발 아데노바이러스를 형 특이적으로 진단할 수 있는 multiplex PCR법을 개발하였다. 각각의 혈청형의 아데노바이러스는 서로 다른 수와 크기의 증폭산물을 나타내었다. 개발된 multiplex PCR법은 다른 호흡기질환 유발 세균 및 바이러스, 인플루엔자 바이러스, 파라인플루엔자 바이러스, respiratory syncytial 바이러스, Chlamydia pneumoniae, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae와 Mycoplasma pneumoniae와 교차반응을 나타내지 않는 높은 특이성을 나타내었다. 개발된 multiplex PCR법의 유용성을 관찰하기 위해 23주의 국내 분리 아데노바이러스를 이용하여 동일한 조건으로 multiplex PCR을 수행한 결과 23주 모두 형 특이적으로 구분할 수 있었다. 결론 : 본 연구에서 개발한 multiplex PCR법은 호흡기질환 관련 아데노바이러스를 형 특이적으로 정확하게 구분할 수 있었다. 이 방법은 아데노바이러스 감염의 신속, 정확한 진단을 가능하게 해줌으로써 치료의 방향설정에 이바지 할 수 있을 것으로 생각되며 아데노바이러스의 유행양상 파악 등 역학적인 목적에도 유용하게 이용될 수 있을 것으로 생각된다.

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