Vibrio cholerae O1군균의 공통항원인 A항원에 대한 단클론 항체 생산과 Fluorescence antibody법에의 적용

초록

목적 : 콜레라의 원인균인 Vibrio cholerae O1의 검출을 위해 혈청형 Ogawa 및 Inaba에 공통으로 존재하는 A항원에 대한 단클론 항체를 제조하고자 하였다. 방법 : Vibrio cholerae Ogawa NIH41과 Inaba NIH 35A를 BALB/c mouse에 면역시켜 얻은 비장세포와 P3x63Ag8 V653형질세포주를 융합하여 융합세포주를 얻었다. 효소면역측정법을 이용해 융합세포주가 내는 단클론항체의 특이성과 민감성을 시험하여쏘 SDS-PAGE와 Immunoblotting으로 단클론 항체의 항원기를 결정하였다. Protein A affinity chromatography를 통해 단클론 항체를 정체하였고 정제된 항체는 형광항체법에 적용하여 콜레라 검출시험에 이용하였다. 결과 : 제조된 단클론 항체 13A의 isotype은 IgG3, κ chain이었으며 혈청형 Ogawa, Inaba에 특이적으로 반응하였다. 효소면역측정법을 이용한 분석을 통해 단클론 항체 13A는 Escherichia coli를 비롯한 장내세균 7종과 기타 Vibrio 속 균들과 전혀 반응하지 않는 것으로 나타나 100%의 특이도를 보였다. 또한 그동안 우리나라에서 분리된 콜레라균 31주에 대해 강하게 반응하였고 non-O1 균에는 전혀 반응하지 않아 높은 특이도를 보였다. Immunoblotting방법으로 항원결정기를 시험한 결과 콜레라균 공통항원인 A항원의 존재위치인 polysaccharide fraction 28kD 부분이었다. 형광항체법의 시험결과, 균 검출한도는 1×10³ cells/㎖ 이었다. 결론 : 위의 실험결과 단클론 항체 13A는 콜레라의 주 원인균인 Vibrio cholerae O1군균을 검출하는데 매우 특이적이어서 콜레라 발생시 균 검출에 유용하게 사용될 수 있을 것으로 생각된다.

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