에이즈치료의 최적화를 위한 항레트로바이러스제 내성주의 약제감수성과 viral fitness 분석

초록

목적 : 항레트로바이러스제 표현형 검사 및 복제능 측정법을 확립하여 내성기전연구의 기반을 마련하고 HIV/AIDS 감염자로부터 분리된 내성변이체의 약제감수성과 viral fitness를 평가하여 임상치료의 최적화에 기여하고자 하였다. 방법 : Single cell level HIV-1 표현형 검사를 위하여 pNL4-3-deltaE-EGFP에 표준주 또는 환자유래 PCR product을 삽입하여 재조합 클론을 제작하였다. HIV-1에 의해 감염된 세포에서 바이러스 복제능을 측정하기 위하여, HIV-1 env위치에 EGFP가 암호화된 reporter virus를 이용하여 표준주 및 환자군 유래의 특정유전자 부위(약제내성 변이체를 보유한 gag-pol region)가 삽입된 재조합 클론을 제작, 293T cell에 transfection, pseudotyped HTV-1 virus를 확보하고 Jurkat cell과 TZM-bl cell을 이용하여 바이러스 복제능 및 약제감수성을 측정하였다. 결과 : Transfection 24시간 경과 시점에서 GFP 발현율을 통해 transfection 효율을 비교한 결과, 75㎠>150㎠, EGFP(WT), 21.74%>EGFP(HXB2), 18.9%>EGFP(RTMC), 15.41%를 알 수 있었다. 확보된 표준주와 대조군 유래 pseudovirus를 Jurkat cell에 감염시킨 결과, pseudovirus양과 비례하여 Jurkat cell에서의 GFP 발현율을 확인할 수 있었다. 또 다른 세포주인 TZM-bl cell에 infection하여 바이러스 복제능을 비교한 결과, infectivity는 EGFP(WT):1.62*10^(5), EGFP(HXB2):1.56*10^(5), EGFP(RTMC):1.45*10^(5) 순으로 확인되었다. 결론 : GFP 발현율 및 X-gal 염색을 통한 표준주 및 환자군 유래 바이러스 복제능 측정은 관례적인 방법보다 정량화된 방법이며, 이번 연구를 통해 single-round assay에 기반한 바이러스 복제능 측정 및 약제감수성 측정법 확립을 위한 내성기전연구의 기반을 마련하였다.

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