EB를 이용한 배아 줄기 세포의 간(liver)세포로의 분화

초록

목적 : 배아 줄기세포를 이용하여 손상된 조직이나 유전병을 치료하는 예가 보고된 바 있다. 배아 줄기세포를 간 질환 치료에 이용하는 세포치료법을 개발하는 것은 매우 의미있는 일이다. 본 연구에서는 알부민 프로모터의 지배 하에 발현되는 EGFP (enhanced green fluorescent protein)를 갖고 있는 배아줄기세포를 배양하여 얻은 EBs (Embryoid bodies)를 이용하였다. 방법 : 배아 줄기세포를 분화시켜 얻은 EB와 PKU 마우스 간조직에 발현하는 EGFP는 형광현미경으로 검겨하고 RT-PCR로 확인하였다. EB의 바깥면에 위하는 내배엽성 세포를 트립신을 사용하여 분리하였다. 내배엽성 세포를 이식한 PKU 마우스 간조직에서 보이는 여러 가지 세포종류를 규명하기 위하여 H&E 염색법과 항체를 이용한 면역 조직학적 방법 등을 사용하였다. 결과 : EB에서 발현되는 알부민 EB를 형성하진 17일 째부터 보이다가 32일 경부터는 사라졌다. 간(liver)세포의 전구체일 가능성이 있는 EGFP를 띠면서 알부민을 발현하는 세포들은 EB를 형성한 지 22일째에 EB의 중앙에서 보였다. Phenylalanine hydroxylase (PAH)와 tyrosine hydroxylase (TAT)와 같은 간세포 특이적인 마커들도 이 시기에 많이 발현하였다. 이러한 GFP 발현세포들을 물리적이고 화학적인 방법으로 분리한 다음 면역억제된 누드마우스와 phenylketonuria (PKU) 모델마우스의 비장에 이식하였다. 이렇게 배아줄기세포로부터 분화된 간세포의 분석과 이들 세포를 이식하여 회복된 PKU 마우스의 치료결과는 분석 중에 있다. 결론 : EB의 형성을 통하여 배아 줄기세포를 내배엽세포로 분화시키고 EB에 트립신을 처리하여 모은 내배엽성 세포를 간세포로 분화시킬 수 있고, 이렇게 얻은 간세포는 PKU와 같은 질환의 세포치료법에 이용할 수 있다.

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