담관암 세포에서 간흡충 분비배설물에 의하여 단계별로 조절된 유전자 발현 분석

초록

목적 : 간흡충증은 간흡충 자체와 그들이 배출하는 분비배설물로 인하여 담도에 병변을 일으키며, 궁극적으로 담관암의 중요한 발병 요인이 된다고 알려지고 있다. 하지만 감염 후 숙주세포에서 일어나는 분자 기작은 아직 밝혀지지 않고 있으므로 본 연구에서는 간흡충 감염에 따른 숙주세포 반응 기작을 이해하기 위하여 담관암 세포주(HuCCTl)에 간흡충 분비배설물을 처리 후 시간별로 발현 변화를 보이는 유전자들을 profiling하였다. 방법 : 800ng/ml 간흡충 분비배설물이 0, 1, 3, 9, 24시간 동안 처리된 HuCCT1 세포에 서 전체 RNA를 주줄 및 cDNA를 합성하였고, 대조군과 처리군 cDNA를 streptavidin-Cy5 및 -Cy3로 각각 labeling하였다. 23,920개의 기능이 알려진 유전자를 포함하는 Ilumina사 human-8 expression bead chip에 hybridization하여 건조 시킨 후 cofocal laser scanner 로 Cy5와 Cy3 현광 세기를 측정하였다. 이들 이미지를 수치화 시키고 systematic variation을 제거하기 위하여 수치 0.05 이하로 filtering하였다. Cy5와 Cy3의 log 비가 2 이상인 수치만을 남기고 나머지는 제거하여 유의한 발현 변화 양상을 보이는 유전자들 을 동정하였다. 결과 : 분비배설물 존재 하에 HuCCT1 세포에서 어느 시간에서 발현 변화를 보이는 440개의 유전자들을 동정하였다. 이들 중 발현 정도가 시간별로 대조군에 비하여 2배 이 상 지속적으로 차이를 보이는 유전자들을 filtering한 결과, 31개 유전자들은 증가하였고 35개는 감소하였다. 발현 변화를 보이는 유전자들의 세포 내 기능을 분석하여 보면 세포 주기, 발암 관련, 단백질 변형, 면역 체계, 신호전달, 세포구조 및 발생 단계에 관여하는 유전자들임을 밝혔다. 결론 : 간흡충 분비배설물은 숙주세포의 유전자 발현 변화에 영향을 미치며 이는 간흡충증 진단 및 치료에 필요한 기초 자료를 제공할 수 있을 것으로 판단된다.

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