수두 실험실 진단체계 확립 및 수두 바이러스의 분자역학적 분석

초록

목적 : 본 연구에서는 수두바이러스 조기검출을 위한 유전자검출법 및 세포배양법을 확립하고 분자역학적 분석과 국내 유행주를 확보하여 국내 수두 예방관리를 위한 자료를 제공하고자 한다. 방법 : 수두의 실험실 진단을 위해 virus transport medium에 채취한 인후도찰물, CSF, 혈액, 혈청을 사용하여 검사를 수행하였다. 세포배양을 위해 A549세포와 MRC-5 세포에 검체를 접종한 후 세포병변효과를 관찰하였고 2~3주까지 배양하여 세포병변이 관찰되면 배지를 수거한 후 -70℃에 보관 후 사용하였다. 유전자검출법 확립을 위해 ORF 38부위를 검출할 수 있는 nested-PCR법을 확보하였고, 수두바이러스 세포배양법 확립을 위해 수두 바이러스 reference(Varicella Glaxosmith kline Biologicals) 및 환자 검체에서 분리한 수두바이러스의 A549 세포에서의 배양법과 면역형광염색법을 확립하였다. ELISA법(Enzygnost Anti-VZV/IgG, IGM, Dade Behring, German)을 사용하여 IgM, IgG를 측정하였고 수두바이러스 Wild type virus와 백신 strain을 감별할 수 있는 ORF62 부분의 PCR-RFLP 분석법을 확립하였다. 결과 : Nested-PCR법을 이용하여 ORF 38부위를 검출할 수 있는 수두진단체계를 확립하였고 2006년도 수두의뢰 가검물 총 42건의 검체 중 PCR 양성 14건을 확인하였고 염기서열 분석 결과 모두 HSV 3(Human Herpesvirus 3 Strain)로 확인되었다. 42건의 환자 검체를 A549 세포에 접종하여 3주의 수두바이러스를 분리하였으며, direct immunofluorescence법으로 양성을 확인하였다. ELISA법(Enzygnost Anti-VZV/IgG, Dade Behring, German)을 이용 하여 11명의 환자의 혈청 중에서 8명의 혈청에서 수두 면역을 확인하였다. 또한 PCR 양성검체 18건에 대한 ORF62 SmaⅠ RFLP 분석결과 모두 수두바이러스 wild type임을 확인하였다. 결론 : 수두진단(ORF38 부위에 대한 nested PCR법과 세포배양법, ELISA 항체검사법, 형광염색법) 및 wild type 여부확인법(ORF62 부위 PCR-RFLP 분석법)을 확립하였다. 향후 바이러스 분리율 향상을 위해 효율적인 감시체계 운영이 필요할 것으로 사료된다.

키워드