사스(중증급성호흡기증후군) 재조합 단백질을 이용한 dual antigen/antibody detection ELISA 진단체계 구축에 관한 연구

초록

목적 : 사스의 조기진단을 위한 진단항원의 대량 생산 및 사스코로나바이러스 뉴클레오캡시드 단백질의 기능 연구를 위하여, 베큘로바이러스를 이용하여 재조합 사스코로나바이러스 누클레오캡시드(rSARS-N)단백질을 발현하였고 이 단백질의 진단용 항원으로써의 유용성을 조사하였다. 방법 : 역전사 중합효소연쇄반응으로 증폭된 사스코로나바이러스 뉴클레오캡시드 전체 유전자를 베큘로바이러스 발현벡터인 His-tagged pEntr_BHRNX에 삽입하여 pEntr_NP7을 구축하였고, pEntr_NP7 벡터와 베큘로바이러스 DNA를 이용하여 곤충세포에서 재조합 베큘로바이러스를 생산하였다. rSARS-N 단백질의 발현율과 항원성은 SDS-PAGE 및 western blot법으로 분석하였으며 rSARS-N 단백질의 진단항원으로서의 유용성은 ELISA법으로 분석하였다. 결과 : 곤충세포에서 발현된 rSARS-N 단백질은 니켈 이온 흡착크로마토그래피법으로 손쉽게 대량으로 정제할 수 있었으며 정제된 단백질은 약 49kDa의 분자량을 갖는 수용성 단백질이었다. 이 단백질은 대장균에서 발현된 rSARS-N 단백질에 비해 최대 2.5배의 높은 항원성을 보였다. 또한, 대장균 에서 발현된 rSARS-N 단백질은 인간코로나바이러스에 대한 혈청과 높은 교차반응을 보이는 반면, 곤충세포에서 발현된 rSARS-N 단백질은 교차반응을 보이지 않는 높은 특이성을 보였다. 결론 : 본 연구에서 생산된 곤충세포 유래 rSARS-N 단백질은 고도의 항원성을 갖는 상태로 대량 발현 및 정제가 용이하며 인간코로나바이러스에 대한 감별진단을 할 수 있는 특이성이 높은 항원으로서 기존의 진단항원인 대장균에서 발현된 rSARS-N 단백질을 대체할 수 있는 유용한 항원임을 알 수 있었고, 이 단백질은 재조합 사스 백신연구를 위해서도 유용할 것으로 생각되었다.

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