호흡기 바이러스 진단을 위한 single-tube multiplex-PCR법의 개발에 관한 연구

초록

목적 : 급성 호흡기 질환을 유발하는 다양한 바이러스인 인플루엔자바이러스 (INFV), 파라인플루엔자 바이러스 (PIV), RS 바이러스 (RSV), 아데노바이러스 (ADV)를 신속하고 정확하게 진단하기 위해서, 이러한 각각의 바이러스에 대한 multiplex-PCR 법을 바탕으로 single tube multiplex PCR법을 개발하여 다양한 호흡기 질환을 야기하는 바이러 스를 하나의 튜브에서 동시에 진단하고자 한다. 방법 : 인플루엔자와 파라인플루엔자 바이러스는 HA, RSV는 N 그리고, 아데노바이러스는 Hexon 유전자의 보존된 부위로 각각의 바이러스에 대한 특이적인 염기서열을 기초로 하여 primer를 제작하였다. 호흡기질환 환자의 검체로부터 Qiagen viral RNA kit를 이용하여 핵산을 추출하였다. 추출된 핵산에는 RNA와 DNA가 모두 포함되어 있으므로 INFV, RSV, PIV에 대한 RNA와 아데노바이러스의 DNA를 하나의 튜브 안에서 동시에 RT-PCR을 수행하여 각각의 바이러스의 특이적인 PCR 밴드를 확인하여 진단하였다. 결과 : INFV 표준주를 이용하여 multiplex RT-PCR을 실시한 결과 인플루엔자 바이러스 A/H1N1, A/H3N2와 B형에 대해 각기 944 bp, 541 bp와 767 bp의 서로 다른 크기의 PCR 증폭되었다. PIV 1, 2 및 3형에 대해 각기 399 bp, 196 bp와 273 bp의 서로 다른 크기의 PCR 증폭되었다. RSV 표준주를 이용하여 multiplex RT-PCR을 실시한 결과 RSV A 및 B형 을 모두 진단할 수 있는 834bp의 RSV 특이적인 밴드를 확인할 수 있었다. ADV 또한 RNA를 추출하는 방법으로 핵산을 추출하고 RT- PCR을 수행하였으나, RT 동안에 ADV의 DNA 손실없이 ADV 특이적인 400 bp의 PCR 밴드를 확인할 수 있었다. 결론 : 호흡기 질환을 야기하는 다양한 바이러스 진단을 위하여 개발된 single-tube multiplex PCR법에 의해 INFV A, B형, PIV 1, 2, 3형, RSV A, B, 호흡기 ADV를 모두 진단할 수 있었다. 이러한 결과는 호흡기 바이러스 질환의 진단에 소요되는 시간적, 경제적 손실을 최소화하여 신속한 유행예측에 따른 질환 확산 방지 및 환자의 치료에 활용할 수 있을 것이다.

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