Fas ligand 발현이 조혈모세포 이식 거부반응 억제에 미치는 영향

초록

연구목적 : 장기이식시 문제가 되는 숙주의 거부반응은 동종이식편에 존재하는 동종 항원을 인식하여 이를 공격하는 활성화 림프구에 의하여 수행된다. 이 활성화 림프구는 정상적으로 Fas - Fas ligand를 통한 신호전달에 의해 세포자연사(apoptosis)를 일으킴에 착안하여 Fas liEand(FasL) 발현이 유도된 이식편을 개발하여 이에 반응하는 활성화 림프구를 선택적으로 제거함으로써 궁극적으로 면역특정 이식편의 성공적 생착을 유도하려는 시도로서 본 연구를 시행하였다. 연구방법 : Balb/C mouse의 대퇴골에서 골수 세포를 얻은 후 다시 Sca-1^(+) 간세포만을 분리하여 2주간 34℃, 5% CO₂하에서 배양하고 실험에 사용하였다. Murine Fas ligand(mFasL) cDNA를 Sca-1^(+) 간세포에서 발현시키기 위하여 retroviral transfer vector인 pLXSN에 mFasL를 subcloning하여, pLFLSN을 제작하고, packaging cell line에 도입하여 얻은 viral supernatant로 Sca-1^(+) 간세포를 transduction하였으며, 이론 48시간 배양하여 발현여부를 확인하였다. 또 발현된 fas ligand의 기능을 확인하기 위하여 Fas ligand를 발현하는 Sca-1^(+) 간세포를 ^(51)Cr로 prelabelling된 Jurkat cell및 C57/BL6 mouse splenocyte와 각각 혼합 배양하여 세포 독성 검사를 하였다. 연구결과 : pLFLSN이 도입된 Sca-1 간세포를 48시간 배양한 후 외부에서 도입된 mFas ligand의 발현여부를 알아보고자 vector specific primer를 이용해 RT-PCR을 실시하였다. 그 결과 pLFLSN이 도입된 조혈모세포에서 mFas lignad를 많이 발현 하고 있음을 확인하였다. 발현된 Fas ligand protein이 제대로 그 기능을 발휘하는 지를 알아보고자 실시한 세포독성 검사에서도 pLFLSN이 도입된 조혈모세포가 탁월한 세포독성능을 가지고 있는 것이 확인되었다. 또한 pLFLSN이 도입된 조혈모세포로 동종간의 transplantation을 시도하여 수여자의 골수 및 말초혈액에서 발현되는지를 알아보고자 하는 실험을 진행중에 있다. 고찰 : 이상의 결과를 통해 Fas ligand의 인위적인 발현이 활성화된 림프구만을 선택적으로 억제하여 동종이식에 수반되는 전신적 면역억제 등의 여러 부작용을 감소시키고, 나아가서는 이식편의 성공적인 생착까지 연장시킬 수 있다면 골수이식술 뿐 만 아니라 각종 질환을 근본적으로 치료할 수 있는 장기 또는 조직이식의 신기원을 가져 올 수 있을 것으로 보이고. 앞으로 널리 이용될 동종간의 간세포치료 (Stem Cell therapy)에도 응용될 수 있을 것이라 사료된다.

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