국내 유행 HCV를 사용한 Replicon cell 제작 및 유전자 변이 분석

초록

목적 : 본 연구는 C형 간염 원인 병원체인 HCV 유전형 중 한국인에서 주로 발생하는 유전자형 분포를 분석하고 한국인에서 호발하는 유전자형을 밝힘과 동시에 이 유전형의 병원체 HCV의 전체 유전자 서열 분석을 바탕으로 세포주에서 증식 가능한 HCV replicon 제작을 목적으로 한다. 방법 : 보건소로부터 확보한 HCV CIA 양성 검체로부터 HCV 유전자를 검출하여 확인 진단하고 HCV 유전형을 분석하였다. 한국인에서 호발하는 유전형에 대한 전체 염기서열 분석을 수행하기 위하여 HCV 유전형 1b의 전체 유전자(약 9.6kb)를 6개 영역으로 나누고 각각의 영역을 증폭하기 위한 Primer를 제작하여 PCR 반응을 수행하였다. 증폭산물을 특정 벡터에 클로닝하여 삽입된 PCR 증폭산물에 대한 염기서열을 BigDye terminator(ABI Prism 377 automatic sequencer)를 이용하여 실시하였다. 결과 : 2006년도에 지방 보건소로부터 확보한 HCV CIA 양성자 검체 41개에서 HCV 유전자를 검출하고 유전형 분포를 확인하였다. 전체 41 검체 중 27건(65.9%)에서 HCV 유전자를 검출하였고 이들 유전자 양성자에서 유전형을 조사한 결과 1b type 11건(26.8%), 2a/2c type 5건(12.2%), 1/2 type 6건(14.6%), 1 type 2건(4.9%), 1b/2a type 1건(2.4%), 2 type 2건(4.9%)으로 분석되어 일반인 집단에서도 유전형 1b가 가장 많이 분포하고 있음을 확인하였다. 유전형 1b의 전체 유전자 서열 분석을 위하여 총 6개 영역(1x=1342bp, 1y=1291bp, 2=2653bp, 3=2487bp, 4x=1299bp, 4y=1041bp) 중 4y 영역을 제외한 5개 영역에 대한 PCR 증폭하여 클론 및 염기서열을 확보하였다. 결론 : 국내에서 유행하는 HCV 유전형은 1b가 가장 많고 그 다음으로 1/2가 차지하였다. 유전형 1b에 대한 HCV 전체 유전자 서열을 밝히고 스스로 증식할 수 있는 벡터 모델을 구축하여 HCV life cycle 등을 밝히는데 자원으로 활용하고자 한다.

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