RAPD PCR분석에 의한 국내 피부 진균속 분류 및 동정

초록

목적 : Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton 등의 피부진균의 분류 및 동정은 환자의 임상학적 관찰, 분리주의 배양학적 특성, 현미경적 관찰에 의하여 이루어지고 있으나 균종에 따라서 다양한 형태의 아형을 가지고 있어 분류 동정 및 판정상 난해한 점이 많다. 본 연구에서는 비교적 간단하고 매우 유용한 것으로 알려진 RAPD PCR분석에 의한 DNA 다형성을 관찰하여 국내 피부진균 임상분리주의 정확한 종의 분류 및 동정 방법을 확립코자 한다. 방법 : 4개의 primer #002(5'TGCCGAGCTG3'), #003(5'AGTCAGCCAC3'), #011(5'CAATCGCCGT3'), #018(5'AGGTGACCGT3')를 사용하여 PCR 최적 조건을 검토하였다. PCR조건은 10mM Tris-HCl(pH8.3), 50mM KCl, 1.5mM MgCl₂ 0.01%(w/v), gelatin, 200mM dNTP mixture, 50pM primer, Taq polymerase(0.025units/㎕), DNA 0.001㎍/㎕의 반응 혼합물이 50㎕가 되도록 하고 반응조건은 2 cycles(94℃ 2분, 34℃ 2분, 72℃ 4분), 401 cycles(94℃ 1분, 34℃ 1분, 72℃ 2분)을 한 후 extention(72℃ 10분)을 시행하였다. 결과 : 대표적인 피부진균으로 알려진 Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton의 표준 균주와 국내 임상분리주 64주에 대한 RAPD PCR 분석에 의한 DNA 다형성은 표준균주와 임상분리주 모두 T. rubrum, T. mentagrophytes, T. tonsurans, T. violaceum, T. ferrugineum 및 M. canis, M. gypseum 등 균종간 사이의 DNA 다형성이 분명한 차이를 나타낸 반면 같은 균종내에서는 동일한 밴드 양상을 타나내었다. 결론 : RAPD PCR 분석에 의한 Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton 피부진균의 분류 및 동정은 균종간에 뚜렷한 DNA 다형성을 나타내고 같은 균종내에서는 동일한 밴드양상을 나타내어 이들 방법에 의한 피부진균의 분류 동정방법은 신속성 및 정확성이 높은 것임을 확인하였다.

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