배아 간 세포를 이용한 유전질환 치료법 개발 : 배아 줄기세포를 분화시켜 얻은 EB에 나타나는 내배엽성 세포의 분화

초록

목적 : 배아 줄기세포를 이용하여 손상된 조직이나 유전병을 치료하는 예가 보고된 바 있다. 배아 줄기세 포를 간질병 치료에 이용하는 세포치료법을 개발하는 것은 매우 의미 있는 일이다. 본 연구에서는 배아줄기세포를 배양하여 얻은 EBs(Embryoid bodies)를 이용하여 in vitro에서 내배엽성 세포가 분화, 분리되는지 확인하고 자 한다. 방법 : 시험관내에서 배아 줄기세포를 분화시켜 얻은 EB 에 존재하는 여러 가지 세포종류를 규명하기 위하여 H&E 염색법, TUNEL을 이용한 형태학적 검사, 항체를 이용한 면역 조직학적 방법 등이 사용되었고 EB의 바깥 면에 위치하는 내배엽성 세포를 트립신을 사용하여 분리하였다. 결과 : H&E 염색과 TUNEL 법을 이용한 형태학적 검사결과 시험관에서 분화시켜 얻은 EB의 중앙부근 에서는 분화시킨 지 일주일 후부터 세포사멸이 관찰되었고 그 후 6주까지 원시 신경관, 판상의 상피세포, 실린 더 구조 등이 관찰되었다. a-fetoprotein과 GATA-4 항체를 이용한 면역 조직 염색법으로 조사된 내배엽성 세포들은 주로 2주에서 4주 사이의 EB에서 관찰되었으며 이들은 EB의 표면에서 강하게 염색되었다. 2주 EB의 표면에 위치한 내배엽성 세포들은 0.05% 트립신의 처리로 분리할 수 있었으며 분리된 세포의 대부분은 a-fetoprotein의 항체로 세포면역 염색되었다. 결론 : 배아 줄기세포를 시험관에서 분화시켜 얻은 EB에서 내배엽성 세포의 위치를 확인하고 이들을 분리해 낼 수 있었다. 이것은 EB의 형성을 이용하여 배아 줄기세포를 내배엽세포로 분화시킨 후 간질병의 세포 치료법에 이용할 수 있는 가능성을 시사한다.

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