바이러스 감염 진단을 위한 다목적 DNA chip 개발

초록

목적 : 최근 DNA chip을 이용한 microarray 방법의 개발로 한번의 시험에 의해 빠르고 간편하면서 많은 정보를 정확하게 제공할 수 있는 진단 kit 개발이 가능하게 되었다. 이러한 DNA chip을 이용하여 다양한 형태의 진단제 개발이 향후의 진단 방법의 주류를 이룰 것으로 판단되어 가장 효과적이고 다양한 용도의 바이러스 유전자 진단용 DNA chip을 개발하고자 하였다. 방법 : 여러 가지 바이러스의 유전자 특성을 분석하여 적절한 유전자 영역을 선택하고 그 유전자의 융합조건을 membrane과 DNA chip pilot study를 통하여 분석하였다. 결과 : Genbank를 통하여 확보된 유전자 서열 및 분리주로부터 직접 확보한 유전자에서 동질성 및 이질성을 고려하여 각 probe와 공통 프라이머를 제작하였다. 공통 프라이머를 사용하여 target DNA 합성을 수행한 결과 해당 바이러스 유전자 영역을 아형에 관계없이 PCR 증폭할 수 있었다. PCR을 이용한 probe 평가를 수행한 결과 각 바이러스 혈청형의 특이 probe는 각각의 혈청형에만 반응함을 확인하였다. 화학적으로 합성된 single stranded probe를 membrane 상에서 융합하였을 경우 probe-PCR product 사이의 hybridization이 일어나지 않아 현재의 probe membrane system으로는 본 연구에서 고안된 DNA chip용 probe의 template 인식능력을 확인할 수 없었다. 반면 pilot chip으로 제작한 아데노바이러스 감별 chip을 이용하였을 때는 아데노바이러스의 여러 아형 중에서 ADV 19형을 확인할 수 있었다. 결론 : 1차년도 연구결과 향후 DNA chip 개발의 비용과 시간을 절감할 수 있는 Dot blot을 이용한 target probe 감도 및 특이도 검색 system 개발이 가능할 것으로 기대되며, 2차년도에 이러한 system이 완성되면 DNA chip뿐만 아니라 각 바이러스 genotype 구분 dot blot 진단도 함께 개발할 수 있을 것으로 생각된다.

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