간염 및 소아설사 바이러스 질환에 대한 특이 진단법 개발: 항원정제 및 단클론항체를 이용한 진단기법의 개발

초록

목적 : 바이러스성 간염을 일으키는 대표적 병원체인 hepatitis B virus와 소아설사를 유발하는 장내바이러스 중 국내에서 빈번한 유행을 초래하고 있는 echoviruses에 대한 단클론 항체 생산을 통해 ELISA 또는 western blot을 이용한 진단제를 자체 개발함으로써 이들 질환의 조기 진단을 실현하고 한국형 바이러스의 진단체계를 확립하여 바이러스질환의 치료에 도움을 주고자 한다. 방법 : HBV 항원을 포함하는 혈청가검물로부터 초고속원심분리에 의해 농축 및 정제하고 echovirus는 감수성 세포를 이용하여 대량 생산하고 초고속 원심분리 및 sucrose density gradient centrifugation에 의해 농축 정제하였다. 각각의 바이러스를 mouse에 면역하여 세포융합 방법으로 단클론 항체를 제작하였다. 결과 : 정제한 HBsAg을 microplate에 coating하여 단클론 항체를 검색하였다. HBV 항체 양성을 나타낸 hybridoma의 absorbance는 0.3이상이 1종, 0.2 이상이 4종이었다. 한편 echo 7 hybridoma 중 3종이 0.2 이상인 반면 echo 30 hybridoma 중에는 1종이 0.3 이상, 3종이 0.2 이상의 absorbance를 보였다. Echo 30을 면역한 mouse 혈청에 대해 다른 enterovirus인 coxsackievirus와의 cross-reactivity여부를 조사한 결과 Echo 30 국내 분리주는 coxsackie B3 ATCC strain과는 cross-reactivity를 보인 반면 coxsackie B3 국내 분리주와는 cross-reactivity을 보이지 않았다. 같은 coxsackie B3 중에서도 ATCC strain과 국내 분리주간에 항원성의 차이를 보였다. Echo 30 국내 분리주는 음성 대조군으로 사용한 정성 mouse 혈청과 전혀 반응을 보이지 않았고 coxsackie B5와도 반응하지 않았다. 결론 : HBV 항원 양성자 혈청으로부터 항원을 농축 정제한 후 mouse에 면역하여 단클론 항체를 제조하있고 echovirus 7과 30감수성 세포를 이용하여 대량으로 항원을 제조한 후 항원을 농축 정제하고 mouse에 면역하여 단클론 항체를 제조함으로써 이들 바이러스 항원 진단의 토대를 구축하였다.

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