RAPD PCR와 ITS -RFLP 분석에 의한 국내 피부진균속 분류 및 동정

초록

목적 : 본 연구에서는 DNA 다형성 분석에 매우 유용한 것으로 알려진 RAPD PCR 분석을 하여 피부진균 임상분리주의 지역간 비교와 정확한 종의 분류 및 동정 방법을 확립하고 ITS-RFLP분석을 통해 피부사상균속의 동정 및 계통간 유연관계를 확립코자 한다. 방법 : 표준균주 12종과 임상분리주에 대한 RAPD는 4개의 primer를 이용하여 200mM dNTP mixture, 50pM primer, Taq polymerase(0.025units/㎕), DNA 0.001㎍/㎕에 buffer를 넣어 40회 시행하였다. ITS-RFLP는 primer ITS1과 ITS4를 이용하여 PCR한 후 13개의 restriction enzyme을 사용하여 나타난 ITS 절편양상을 관찰하여 피부진균속의 계통학적 유연관계를 확립하였다. 결과 : 표준균주와 임상분리주에 대한 RAPD PCR을 실시한 결과 T. rubrum, T. mentagrophytes, T. tonsurans, M. ferrugineum, T. violaceum 및 M. conis, M. audouinii, M. gypseum의 균속간의 차이뿐만 아니라 균종간에서도 뚜렷한 차이를 나타내었다. 국내 서울, 광주, 대구에서 분리된 Trichophyton 속의 임상분리주에 대한 DNA 다형성은 T. rubrum과 T. mentagrophytes의 일부 분리주에서 주요 밴드양상과는 유전적 차이가 있음을 알 수 있었다. ITS-RFLP의 결과를 근거로 하여 작성한 계통학적 유연관계에서는 T. violaceum이 Microporum속과 M. gypseum과 M. canis는 Trichophyton속에 유연관계가 더 가까운 것으로 나타났다. 결론 : 국내 피부사상균속에 대한 RAPD 분석은 균종간에 분류 및 동정에 매우 유용하였으며 ITS-RFLP 분석에 의한 계통학적 유연관계는 기존의 형태학적 분류와는 다소 차이를 나타내어 피부사상균에 대한 계통학적 유연관계를 재확립할 필요성이 요구된다.

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