고충(Sparganum)으로부터 진단 후보 물질의 탐색

초록

목적 : 고충증(sparganosis)은 폐흡충의 이소기생 및 유구낭미충증과 함께 우리나라의 3대 조직침입 연충질환이며, 국민보건을 위협하는 주요한 기생충증의 하나이다. 본 연구의 목적은 이차원 전기영동과 환자 혈청을 이용한 면역단백체 분석을 통하여 고충 단백체로부터 고충증에 대한 진단 후보 단백질을 발굴하는 것이다. 방법 : 고충증 감염 환자의 혈청을 확보하고 감염상 변화를 조사하기 위해 약 1,152명의 주민으로부터 확보한 혈청을 이용하여 고충의 조항원에 대해 ELISA 분석을 실시하여 항원성 민감도를 측정하였고, 양성 및 음성 대조군과 비교하였다. 고충의 단백체로부터 항원 단백질을 확인하기 위해 충체 파쇄물을 단백체 전개지도 pI 3-11 범위에서 확인하였고, 항원성 단백질의 분리능을 높이기 위해서 pI에 따른 전분리한 후, 세부 전개지도를 구축한 다음 면역이적법을 통해 항원단백질을 선정하여 질량분석을 통해 동정하였다. 결과 : 고성군은 294명 중 15명(5.1%), 철원군은 312명 중 18명(5.8%), 새터민은 316명 중 8명(2.5%), 옹진군은 230명 중 2명(0.9%)이 양성 대조군과 같은 수준의 항원성을 나타내었다. 고충의 단백체로부터 항원 단백질을 확인하기 위해 고충의 단백질 시료를 pI 3-11 범위에서 분리하였다. pI에 따라 분리된 각 분획의 단백질을 일차원 전기영동 후 고충의 환자 혈청을 이용하여 각 분획의 항원성을 확인하여, pI 3-4.6과 4.6-5.4의 분획에서 분자량 200kDa, 95kDa, 37-29kDa의 단백질들이 높은 항원성을 나타냄을 확인하였다. 그리고 pI 3이하의 분 획에서 분자량 100kDa과 90kDa의 강한 항원성 단백질을 확인하였다. pI 4-7 분획에서 이차 원 전기영동을 통해 일차원 전기영동에서 보인 항원성 단백질들이 동일한 분자량임을 확인하였다. 항원성 단백질로 확인된 각 7개의 spot을 ESI-MS/MS를 이용, 질량분석하여 6개의 단백질 spot들이 NCBI DB 검색을 통해 유의값 최소 52이상으로 paramyosin으로 동정되었다. 결론 : 고충의 면역단백체 분석을 통해 항원성 단백질로 paramyosin을 동정하였다. 향후 재조합단백질의 발현을 통해 항원성을 재확인하고 질량분석의 정확성을 증가시키기 위해 고충의 cDNA의 단편 서열분석을 하여 EST library를 구축할 필요성이 제기되었으며, 면역단백체 분석을 통한 항원성 단백질의 발굴을 위해 이차원 전기영동 분석 외에 Non-2D분석을 통한 단백체 분리와 각 분획에 대한 항원성 검증을 수행하고자 한다.

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