핵내 전사체의 발현 및 alternative splicing 분석을 통한 세포내 대사 조절기작에 관한 연구

초록

목적 : Alternative splicing variants 인 c-FLIP_(L)과 c-FLIP_(S)의 암발생과정에서의 기능연구로서, NF-κB에 의해 유도된 c-FLIP_(L) 발현은 어떻게 사멸수용체를 유도하고 세포사멸에 활성화된 NF-κB에 의해 중단되는지를 설명한다. c-FLIP_(L)과 다르게 c-FLIP_(S)효과적으로 TNFR1 유도의 세포사멸을 저해하고 TRAF-2와의 반응을 통하여 JNK 활성화를 자극한다. 따라서, 본 연구에서는 c-FLIP_(S) 조절과 TNFR1 신호전달경로의 관계를 규명하고자 하였다. 방법 : 세포배양에 사용된 암세포주는 ATCC회사것으로, RPMI-1640에 10% FBS를 첨가하여 37℃에서 5%의 CO₂로 배양하였다. c-FLIP_(L)과 c-FLIP_(S) 발현실험을 위하여 RT-PCR을 기반으로 둔 cloning방법으로 pcDNA 3.1 topo His/V5 벡터(Invitrogen)를 사용하였다. c-FLIP_(L)과 c-FLIP_(S) 발현량 실험은 Real-Time PCR을 이용하여 측정하였다. 세포사멸분석실험은 DNA fragmentation 분석방법을 이용하여 FACS로 실험군당 20,000 세포를 측정하였다. 결과 : 다양한 인간 암 세포주에서 c-FLIP의 발현을 Real-Time PCR 실험으로 관찰한 결과 TNFR1 유도 세포사멸은 c-FLIP_(S)의 발현 정도에 의존하는 것으로 나타났다. 또한 c-FLIP_(S)의 발현 정도와 TNF에 대한 세포의 민감도 연관이 있는 것으로 나타났고, c-FLIP_(S)의 기능은 TNFR1 유도의 JNK활성화가 일어났다. 그 결과로서 c-FLIP_(S)과 c-FLIP_(L)은 TNFR1 유도 세포 사멸을 저해한다. 그 중에서도 c-FLIP_(S)이 더 효율적으로 세포사멸을 막고 세포생존에 기여한다. 결론 : 본 연구 결과는 TNF_(α) 유도 세포사멸경로에 있어서 TRAF-2의 c-FLIPS와의 친화도가 c-FLIP_(L)보다 높으며 JNK 활성화를 억제하고 TNFa 유도 세포사멸에 저항을 동반한다는 새로운 기작에 대한 증거를 제시하고 있다. c-FLIP_(S)과 c-FLIP_(L)는 다른 역할을 가진 것으로 보이는데 이러한 결과는 주로 TNF 유도에 의한 JNK 활성화의 지지 역할로 보여진다. 이러한 결과와 부합하는 이전 데이터에서도 c-FLIP_(S)의 특이적인 CD40 신호전달 역할을 포함하여 각 c-FLIP에 따른 상이한 기능을 보여주고 있다.

키워드