Enterococcus faecium에서 quinupristin/dalfopristin의 내성기전 규명

초록

목적 : 반코마이신 내성 그람양성구균 감염증 치료에 사용되는 quinupristin/dalfopristin(Q/D)의 내성 기작은 주로 streptogramin A acetyltransferase나 ABC transporter에 의해 획득되는 것으로 알려져 있으나 Q/D 내성주 중 임상분리주와 동물분리주의 약 30%에서는 내성기전이 규명되지 않고 있다. 따라서 Q/D 내성 E. faecium의 내성유전자의 특성 및 기전을 규명하고자 하였다. 방법 : 국내의 임상 및 동물에서 분리된 Q/D 내성 E. faecium(동물주 182주와 임상분리주 73주)을 대상으로 Q/D 내성 양상 및 MIC 조사하고 Q/D 내성유전자형을 결정하였으며, vat 유전자의 conserved sequence에서 제작된 MN primer로 PCR 확인하였다. Conjugation, RFLP를 실시하였고 내성분리주의 분자역학적 연관성은 PFGE와 MLST를 이용하여 조사하였다. 결과 : Q/D 내성유전자로 밝혀진 streptogramin A acetyltransferase의 vat 유전자의 경 우 vatE(40.7%), vatD(14.8%), vatG(4.4%)로 나타났고 MN 형도 10.4%에 달하였으나 ABC transporter에 관련된 vga, vgaAv, vgaB, vgb 유전자는 검줄되지 않았다. 동물분리주에서는 고도내성주가 53.2%이었으며 non-type에서는 고도내성주는 13.5%에 불과하였고 대부분 저도 내성을 나타내고 있었으며 특히 임상분리주인 경우에는 2주를 제외하고는 모두 저도 내성인 것으로 확인되었다. vatD, vatE, vatG의 전체 염기서열 분석 결과 vatD와 vatG에서는 염기서열에 변화가 없었으나 75주의 vatE중 5주가 vatE-3이고 70주는 vatE-1인 것으로 확인되었다. MN primer로 검출된 E. faecium의 plasmid DNA를 분리하여 RFLP로 확인한 결과 20주에서 15개 유형으로 나타났다. Non-type의 Q/D 내성 E. faecium(≥12mg/L) 21주를Obroth mating 방법에 따라 conjugation을 수행한 결과 접합 빈도는 1.3×10^(-7)에서 7.9×10^(-10)로 비교적 낮게 나타났다. vatG의 PFGE 유형은 동일 농장에서 분리된 3주를 제외하고는 PFGE 양상이 매우 다양하게 나타났다. 동물이나 임상에서 분리된 E. faecium 중 내성유전자가 밝혀진 89주의 MLST 분석 결과 각각 ST8, ST236, ST14인 것으로 나타났다. 결론 : Q/D 내성 E. faecium에서 60%가 내성유전자를 지니고 있었으나 MN과 non-type의 Q/D 내성 E. faecium의 RFLP와 conjugation 결과 2개 이상의 새로운 내성기작이 작용할 것으로 예상되었다.

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