장내바이러스 게놈 분석을 통한 병원성 결정인자와 세포내 증식억제 기작 규명 및 응용에 관한 연구: 장내바이러스의 유전자 정보를 이용한 진단법 개발 및 유효성 분석

초록

목적 : 무균성뇌막염의 원인 바이러스인 장내바이러스의 유전자 진단시 이용될 수 있는 내위 표준 RNA(internal standard RNA)룰 개발하여 신속 정확한 유전자 진단법으로 이용되는 RT-PCR법의 검체 선택 한계를 극복하고자 하였으며 장내바이러스 진단시와 마찬가지로 분변 검체가 사용되는 비세균성 설사질환의 원인바이러스인 소형구형 바이러스(SRSV), 로타바이러스, 아스트로바이러스 등의 유전자 진단시 RNA 추출 및 RT-PCR 과정의 대조물질로 사용될 수 있는 가능성을 분석하였다. 방법 : 토마토 전사조절인자인 2A11 유전자를 외래 유전자로 사용하여 내위표준 RNA 합성을 위한 cDNA를 클로닝하고 in vitro transcrpition을 수행하였다. 합성된 내위표준 RNA(intemal standard RNA)의 검출 한 계 및 내위표준 RNA와 진단하고자 하는 바이러스 유전자와의 비경쟁적 증폭반응을 확인하기 위하여 5ng의 내위표준 RNA를 분변검체에 직접 첨가한 후 RNA추출 과정 및 RT-PCR반응을 수행하고 아가로스 전기영동을 통하여 내위 표준 RNA의 증폭 여부를 분석하였다. 결과 : 장내바이러스 또는 설사 유발 RNA 바이러스의 유전자 진단 각 단계 중 어느 단계에서 오류가 발생하는 지 확인할 수 있었으며 분변 검체에 첨가된 내위 표준 RNA는 RT-PCR 과정에서 진단하고자 하는 바이러스의 유전자와 경쟁반응이 없이 증폭되는 것을 로 확인하였다 . 결론 : 장내바이러스와 설사유발 RNA 바이러스의 진단에 사용할 수 있도록 primer site를 고안한 결과 진 단h하고자 하는 바이러스 유전자와의 경쟁반응 없이 로타바이러스 및 소형구형 바이러스의 유전자 진단과정에서도 내위표준 RNA가 효과적인 표준물질로 사용될 수 있음을 확인하였다.

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