Survivin의 세포사멸 억제기작과 NF-κB에 의한 발현조절에 관한 연구

초록

목적 : survivin은 암세포에 특이적으로 발현되어 세포사멸을 저해함으로써 암세포의 불멸성에 중요한 역할을 하는 IAP(inhibitor of apoptosis protein)이며 NF-κB는 면역과 염증반응등을 포함하는 다양한 생리적인 역할에 관여한다. 본 연구에서는 survivin과 mitochondria 관련 apoptosis factor와의 변화를 측정하여 survivin의 세포사멸 억제 기작과 anti-apoptosis transcription factor로 알려져 있는 NFκB에 의한 survivin의 발현조절에 관한 연구를 수행하고자 하였다. 방법 : Survivin의 세포사멸 억제기작을 알아보기위해 hammerhead ribozyme에 의해 survivin의 발현을 감소시킨 암세포에서 mitochondria dependent apotosis에 관련된 factor들의 변화를 western blot analysis로 확인하였다. NFκB에 의한 survivin 발현조절을 위해서는 survivin promoter를 분리하여 promoter 내에 존재하는 putative NFκB에 대한 biological function의 분석과 NFκB inhibitor인 PDTC에 의한 survivin의 발현감소, survivin promoter 활성감소, NF binding activity 감소등을 측정하여 NFκB에 의해 survivin의 발현 조절을 알아보았다. 결과 : Survivin specific hammerhead ribozyme을 암호화하는 adenovirus를 MCF-7 cells에 감염시켰을 때 survivin의 mRNA와 protein level이 감소하였고 또한 apoptotic stimuli인 serum starvation이나 화학적치료제인 etoposide에 대한 감수성이 증가하였다. 또한 survivin의 감소로 인해 일어나는 apoptosis의 증가가 어떠한 pathway에 의하여 일어나는지 알아보기위하여 death receptor와 mitochondria mediated pathway에 관련된 apoptotic factor에 대한 western 결과 caspase 3, caspase 9, Apaf-1, bax가 증가함을 보여 mitochondrial mediated pathway에 의하여 apoptosis가 일어남을 확인하였다. 또한 NF-kB에 의한 survivin 의 발현변화를 알아보기위하여 AGS cell에 NF-κB의 inhibitor인 PDTC를 처리하였고 그 결과 survivin의 RNA와 protein level이 현저하게 감소함을 확인하였다. NF-κB에 의하여 조절을 받는 survivin promoter내의 response element를 확인하기위하여 deletion construct를 만들었고 그 결과 0.2kb에서도 PDTC에 의한 survivin promoter activity가 감소하였고 따라서 0.2kb내의 putative NF-κB binding site가 존재함을 확인하였다. 결론 : Survivin에 의한 세포사멸의 억제는 mitochondria pathway를 경유하여 이루어지며 survivin의 조절이 NF-κB에 의하여 이루어짐을 확인하였다.

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