호흡기환자에서 분리한 Haemophilus influenzae의 β-lactam계 항생제에 대한 내성 연구

초록

목적 : 국내 호흡기감염환자로부터 분리된 H. influenzae를 대상으로 β-lactam계 항생제에 대한 내성 현황을 파악하고 이를 통해 확인된 ampicillin 내성 H. influenzae의 주요 내성 기전을 파악함으로써 H. influenzae에 의한 호흡기 감염질환 치료 시 적정한 치료 항생제 선택과 내성균 관련 기초 자료를 제공하고자 한다. 방법 : 2005년~2006년까지 전국 8개 시도 20개 병의원에 내원한 급성호흡기감염증 환자의 비강 흡인액으로부터 분리한 H. influenzae 367주를 대상으로 하였다. 대상 균주는 12종의 항생제 디스크를 이용하여 항생제 내성 검사를 실시하였고, nitrocefin이 함유된 Cefinase disk(BBL)를 사용하여 β-lactamase 생성 여부를 확인하였다. Ampicillin 내성 213주는 액체배지미량희석법을 이용하여 최소억제농도를 측정하였고, TEM-1 과 ROB-1 유전자 검출 및 PBP 3의 유전자인 ftsI의 염기서열 분석을 통한 변이 조사를 통해 내성 기전을 파악하였다. 또한, β-lactamase-negative, ampicillin-resistant Hif(BLNAR) 균주 간의 유전적 상관관계를 분석하고자 PFGE를 수행하였다. 결과 : 본 사업의 대상균주인 H. influenzae 367주 중 94.3%(346주)는 type a~f 특이항혈청과 반응하지 않는 nontypable 균주였다. H. influenzae 367주는 ampicillin, TMP-SMX, tetracycline, chloramphenicol에 각각 58.0%, 50.4%, 12.5%, 그리고 8.7%의 내성을 보였다. 또한, 경구용 세파계 항생제인 cefaclor에 대한 내성률은 3.5%였으며, ceftriaxone과 azithromycin에 대해서도 각각 0.3% 정도 비감수성 균주가 확인되었다. 한편, amoxicillin/clavulanate, cefotaxime, ciprofloxacin, levofloxacin에 내성을 보이는 균주 는 없었다. Ampicillin 내성 213주의 ampicillin 내성 MIC 범위는 4~> 512㎍/㎖이었으며, MIC_(50)은 256, MIC_(90)은 > 512이었다. 이들 균주 중 191주(89.7%)는 β-lactamase를 생 성하였고, 22주(10.3%)는 β-lactamase를 생성하지 않았다. β-lactamase를 생성하는 ampicillin 내성 191주 확인 결과, 178주(93.2%)는 TEM-1 유전자만을, 9주(4.6%)는 ROB-1 유전자만을, 2주(1.1%)는 TEM-1과 ROB-1 유전자를 모두 가지고 있었고 2주(1.1%)는 TME-1과 ROB-1 유전자 모두 검출되지 않았다. 국내 호흡기감염환자로부터 분리한 H. influenzae로부터 BLNAR 균주를 확인하였고, 이들은 전체 균주의 6%에 해당하였다. 이들 균주들의 PBP3상의 변이를 확인한 결과 Met377→Ile, Ser385→Thr, Leu389→Phe, Arg517→His, Asn526→Lys 변이가 있었으며, 이런 변이를 근거로 subgroup을 구분하였을 때 일본에서 확인된 형태와 상이한 변이 조합을 보였다. 한편, BLNAR 균주들은 국내 다양한 지역에서 분리된 상호 연관성이 없는 균주들인데 PFGE 분석 결과 매우 큰 유전적 다양성을 확인할 수 있어 BLNAR 균주의 출현은 여러 지역에서 산발적으로 발생하고 있음을 확인하였다. 결론 : 호흡기감염환자로부터 분리한 H. influenzae는 이미 높은 ampicillin 내성률을 보이며, 대부분의 내성 균주들이 TEM-1 β-lactamase 생성에 의한 ampicillin 내성 기전을 가지지만 BLNAR 균주의 출현이 확인됨에 따라 치료 항생제 선택 시 고려해야 하며 지속적인 BLNAR 균주의 감시 및 내성기전에 대한 종합적인 분석이 요구된다.

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