장내바이러스성 질환 예방을 위한 공통항원 분석과 조기 진단법 및 백신 후보물질 개발에 관한 연구

초록

목적 : 무균성 뇌막염, 수족구병, 급성유행성 각결막염 등 인체에 여러 가지 질병을 유발하는 장내바이러스는 바이러스 배양을 통한 중화시험법이 진단에 널리 사용되고 있으나 진단을 위해 소요되는 시간이 매우 길며 혈청형의 교차반응 및 세포의 감수성 차이에 의하여 모든 장내바이러스를 진단할 수 없는 단점이 있다. 이러한 단점을 보완하기 위하여 장내바이러스의 유전자를 직접 확인할 수 있는 RT-PCR법이 개발되어 있으나 진단에 사용할 수 있는 검체가 뇌척수액으로 한정되어있다는 단점이 있다. 이러한 문제점을 해결하기 위하여 본 연구에서는 백신후보물질로 사용할 수 있는 장내바이러스 공통항원의 확보 및 신속, 민감한 진단법 개발을 수행하였고 아울러 국내에서 유행한 장내바이러스의 분리, 동정을 통한 체계적인 역학조사를 실시하였다. 방법 : 지난 3년간의 사업수행기간 동안 15종의 장내바이러스를 국내 환자로부터 분리하여 특성분석을 완료하였으며 무균성 수막염의 대유행과 관련이 있는 E6, E30, CVB2, CVB3와 CVB5에 대한 단클론/다클론 항체를 확보 하였다. 이중 CVB3의 경우 LD-PCR을 이용하여 전체 유전자 염기서열을 결정함으로써 분자유전학적인 기초자료를 구축하였다. 장내바이러스 공통항원 분석을 위하여 λgt11을 이용한 장내바이러스 cDNA library 제작하고 immunoscreening을 통한 장내바이러스의 공통항원 부위를 선택 및 클로닝을 실시하였다. 결과 : RT-PCR법의 문제점으로 지적되고 있는 검체 선택성의 한계를 개선하기 위하여 장내바이러스성 질환자의 치료에 실제 이용할 수 있는 standard RNA RT/PCR 법을 고안하고 현재 특허출원중(출원번호 10-1999-0019626)에 있다. 발현된 공통항원제조 및 항원성 확인하여 현재 특허 출원중이다(출원번호 10-1999-0019625). 결론 : 1) 지속적인 장내바이러스 감시체계를 전국으로 확대해야 하며, 2) standard RNA를 이용한 RT-PCR법의 확립으로 다양한 검체로부터 장내바이러스의 유전자를 확인할 수 있는 개선된 진단법을 제공하였고, 3) 장내바이러스 공통항원의 확보로 장내바이러스성 질환 예방을 위한 백신 개발에 중요한 자료로 이용될 수 있으며, 4) 공통항원에 대한 항체 확보를 통하여 신속한 항원 진단법인 one-step 진단 kit 제조가 가능하게 되었다.

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