디프테리아, 테타누스 독소융합 단백 발현에 관한 연구(Ⅱ)

초록

Clostridium tetani Harvard 균주의 plasmid를 주형으로 테타누스 독소중 L chain을 암호하는 1.3kbp DNA를 PCR 방법으로 생산했다. 생산된 PCR 생성물을 PCR™Ⅱ에 클로닝했으며 염기서열을 결정하여 양말단의 primer와 primer 합성시 stop codon과 KpnⅠ 인식부위을 확인했으며 이미 보고된 L chain 염기 서열과 동일함을 확인했다. 또한 완전한 테타누스 유전자를 클로닝하기 위해 chromosomal DNA와 plasmid를 BamHⅠ, HindⅢ와 SalⅠ으로 자른 후 PCR생성물을 Dig으로 표지하여 southern blot한 결과 HindⅢ로 절단한 DNA 절편 중 5~6kbp에서 발색되었다. PCR 방법으로 생산한 디프테리아의 A 절편과 테타누스의 L chain DNA를 융합시켜 pBluescript SK(+)에 클로닝했다. Streek 등은 Corynebacteriophage attachment site P를 제안했었다. 우리는 처음으로 attachment site B를 클로닝했으며 이 attB region은 13개의 염기로 구성되어 있으며 이를 중심으로 phage DNA와 chromosomal DNA가 연결되어 있었다.

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