Ciprofloxacin 내성 Neisseria gonorrhoeae의 Non-target site 변이 내성기작 규명

초록

목적 : 임균의 주요 치료제인 ciprofloxacin에 대한 내성기작은 gyrA와 parC의 돌연변이에 의해 일어나는 것으로 널리 알려져 있다. 그러나 이외의 내성기전이 다른 균종에서 보고된 바 있고 돌연변이 양상과 MIC값이 일치하지 않는 임균들이 다수 분리되어 또 다른 내성기전의 존재 가능성을 시사하였다. 본 연구는 ciprofloxacin에 대한 gyrA와 parC돌연변이 이외의 내성기작을 조사하기 위해 수행되었다. 방법 : 1차년도에 ciprofloxacin으로 내성을 유도한 균주를 대상으로 원균주와 내성유도주의 OMP를 sarkosyl method를 이용하여 추출하고 2차원 전기영동과 MS/MS를 통해 발현량이 차이나는 단백질을 분석하였다. Transposon mutagenesis를 위해 Tn5를 포함하는 pMOD-3와 pGFP를 cloning하여 transposon delivery vector를 제작하였다. 결과 : 92WT과 isogenic 내성유도주 92mul3의 OMP를 SDS-PAGE와 2-DE 분석으로 비교한 결과 29kDa에서 50kDa까지의 범위내에 존재하는 단백질의 발현수준에서 큰 변화를 나타내었다. 발현량이 크게 차이 나는 주요 단백질로는 porin, porin precursor, pilus secretion protein등 물질의 막 투과와 관련된 단백질과 대사에 관련된 효소류 등이 MS/MS에 의해 동정되었다. 내성관련 유전자 규명을 위해 transposon을 임균의 genomic DNA에 도입하고자 Tn5를 포함하는 pMOD-3에 marker로서 GFP gene을 삽입하여 transposon delivery vector를 제작하였다. 결론 : 임균 OMP 단백질체 분석결과, porin 투과성 변이 및 pilus secretion protein 발현감소 등이 포함된 새로운 내성기작이 임균의 ciprofloxacin 및 다제 내성에 영향을 미치는 것으로 추측되었다. 향후 후보 단백질이 내성기작에 기여함을 증명하고 transposon을 이용한 random mutagenesis를 통해 global regulator등 내성기작에 관여하는 유전자를 찾는 연구가 계속되어야 할 것이다.

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